目的:探索环状RNA(circRNA)circ_0000517是否通过miR-1258/高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1，HMGB1)调节胃癌细胞的增殖、周期和迁移。方法:选取2018年1月至2019年10月于中国人民解放军总医院接受手术的胃癌患者37例，收集37对胃癌组织标本和相邻的正常组织标本(癌旁组织)。实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)和Western blot法分别检测胃癌组织中circ_0000517、miR-1258和HMGB1蛋白表达。在胃癌HGC-27细胞中转染si-NC(si-NC组)、si-circ_0000517(si-circ_0000517组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-1258模拟物(miR-1258组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-1258(anti-miR-1258组)、si-circ_0000517+anti-miR-1258(si-circ_0000517+anti-miR-1258组)，另将未转染的HGC-27细胞设为对照组(Con组)。应用细胞计数试剂盒8(cell counting Kit-8，CCK-8)法、集落形成实验和流式细胞术测定HGC-27细胞增殖、周期变化，划痕实验和Transwell实验测定HGC-27细胞迁移变化。荧光素酶活性检测分析circ_0000517和miR-1258、miR-1258和HMGB1的靶向结合。结果:胃癌组织中circ_0000517和HMGB1蛋白的表达水平高于癌旁组织，miR-1258表达水平低于癌旁组织，差异有统计学意义[(4.33±0.16)比(0.98±0.12)，(0.67±0.05)比(0.12±0.01)，(0.25±0.05)比(0.97±0.15)， t值分别为101.89、65.61和27.70， P值均<0.05]。在胃癌HGC-27细胞中沉默circ_0000517后，与Con组或si-NC组相比较，si-circ_0000517组circ_0000517和HMGB1蛋白表达水平明显降低，miR-1258表达水平及G0-G1期细胞比例明显升高，差异具有统计学意义( F值分别为2370.38，141.50，2497.63和26.32， P值均<0.05)；si-circ_0000517组S期细胞比例、细胞活性和集落形成数均低于Con组或si-NC组，差异有统计学意义( F值分别为123.72、92.75和600.68， P值均<0.05)。沉默circ_0000517后，si-circ_0000517组HGC-27细胞的划痕愈合率比Con组或si-NC组减少了约51.69%或53.36%，迁移细胞数比Con组或si-NC组降低了约58.29%或57.89%。circ_0000517、miR-1258和HMGB1互补序列及荧光素酶活性检测显示，miR-1258组WT-circ_0000517及WT-HMGB1的荧光素酶活性均明显低于miR-NC组[(0.35±0.02)比(0.99±0.09)，(0.16±0.01)比(1.01±0.09)， t值分别为20.83和28.16, P值均<0.05]。miR-1258过表达后，miR-1258组miR-1258的表达及G0-G1期细胞比例高于Con组或miR-NC组，差异有统计学意义( F值分别为2221.87和15.61， P值均<0.05)；HGC-27细胞的HMGB1蛋白表达、S期细胞比例、细胞活性、集落形成数、划痕愈合率和迁移细胞数低于Con组或miR-NC组，差异具有统计学意义( F值分别为42.56、73.32、28.50、229.72、88.34和407.64， P值均<0.05)。在胃癌HGC-27细胞中抑制miR-1258后，anti-miR-1258组miR-1258的表达水平低于Con组或anti-miR-NC组( F＝757.24， P<0.05); si-circ_0000517+anti-miR-1258组HMGB1蛋白表达、S期细胞比例、细胞活性、集落形成数、划痕愈合率和迁移细胞数均高于si-circ_0000517组，G0-G1期细胞比例低于si-circ_0000517组，差异有统计学意义( F值分别为145.04、343.39、145.74、892.23、151.58、430.73和66.58， P值均<0.05)。 结论:沉默circ_0000517通过靶向miR-1258下调HMGB1，抑制胃癌细胞增殖和迁移，并阻滞细胞周期。

胃癌;circ_0000517;miR-1258;高迁移率族蛋白1;增殖;周期;迁移

庄紫伟;梁文全;高云鹤;鲁意迅;王闯;范佳琳;陈凛

中国人民解放军医学院，北京　100853;中国人民解放军总医院普通外科医学部，北京　100853

国际免疫学杂志

[1]庄紫伟;梁文全;高云鹤;鲁意迅;王闯;范佳琳;陈凛-.沉默circ_0000517通过miR-1258/HMGB1对胃癌细胞的影响)[J].国际免疫学杂志,2022(01):5-14

0000517+anti

miR,HMGB1,胃癌细胞,circRNA,高迁移率族蛋白,high,mobility,group,box,细胞的增殖,中国人民解放军,解放军总医院,胃癌患者,胃癌组织,组织标本,正常组织,癌旁组织,实时定量聚合酶链反应,quantitative,real,polymerase,chain,reaction,qRT,blot,HGC,转染,si,NC,Con,试剂盒,cell,counting,Kit,CCK,集落形成,流式细胞术,周期变化,划痕实验,Transwell,实验测定,细胞迁移,荧光素酶活性,活性检测,检测分析,蛋白表达水平,G0,G1,细胞活性,愈合率,互补序列,WT,过表达,细胞增殖和迁移,细胞周期

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