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长效生长激素相关蛋白含量检测反相高效液相色谱法的建立及验证
文献摘要：
目的 建立长效生长激素(recombinant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)相关蛋白含量检测的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并进行验证.方法 通过质谱肽图法进行rhGH-Fc相关蛋白结构解析后建立相关蛋白含量检测的方法,优化梯度洗脱方法和流动相方案,并对该方法进行重复性、专属性、耐用性验证,确定检测限和定量限.用建立的方法检测rhGH-Fc氧化加速试验样品、脱酰胺加速试验样品及不同批次纯化液样品.结果 建立的RP-HPLC法色谱柱为ZORBAX 300SB-C18(4.6 mm×250 mm,5-Micron),柱温45℃,上样量40 μg,流速0.7 mL/min,检测波长280 nm;流动相A为30％乙腈+0.1％三氟乙酸,流动相B为80％乙腈+0.1％三氟乙酸;梯度洗脱方法为0～10 min,10％B→50％B;10～50 min,50％B→90％B.rhGH-Fc的相关蛋白主要产生在4个氧化位点和2个脱酰胺位点处.建立的RP-HPLC检测方法重复性验证RSD为1.8％;蛋白缓冲液对检测结果无干扰;耐用性验证RSD为0.05％;在相同色谱柱条件下,不同设备、不同时间配制的流动相、不同柱温对检测结果无明显影响;方法检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.025 mg/mL.结论 成功建立了rhGH-Fc相关蛋白含量的RP-HPLC检测方法,该方法重复性、专属性、耐用性良好,可用于rhGH-Fc相关蛋白含量的检测.
文献关键词：
长效生长激素;反相高效液相色谱法;蛋白含量
中图分类号：
作者姓名：
赵鑫;俞露;孙瑞欣;朱秋媚;王江林;刘涵;刘玉林;刘景会;邹勇
作者机构：
长春生物制品研究所有限责任公司细胞因子室,吉林长春130012
文献出处：
引用格式：
[1]赵鑫;俞露;孙瑞欣;朱秋媚;王江林;刘涵;刘玉林;刘景会;邹勇-.长效生长激素相关蛋白含量检测反相高效液相色谱法的建立及验证)[J].中国生物制品学杂志,2022(01):85-90
A类：
长效生长激素,蛋白结构解析,300SB
B类：
蛋白含量,含量检测,测反,反相高效液相色谱法,recombinant,human,growth,hormone,Fc,rhGH,RP,HPLC,肽图,图法,梯度洗脱,脱方,流动相,专属性,耐用性,定检,检测限,定量限,加速试验,法色,色谱柱,ZORBAX,C18,Micron,柱温,上样量,乙腈,+0,三氟乙酸,RSD,缓冲液,果无,无干扰
AB值：
0.241372
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