典型文献
CD19嵌合抗原受体T细胞制备条件优化及其体内外杀伤作用研究
文献摘要：
目的:优化小鼠CD3 +T细胞体外刺激活化体系及最佳感染时间，构建小鼠CD19嵌合抗原受体T细胞（mCD19 CAR-T），并验证其在体内外的杀伤效果。 方法:磁珠分选纯化小鼠的脾脏CD3 +T细胞，在可溶性抗CD3/CD28抗体、佛波酯+离子霉素、包被抗CD3/CD28抗体3种不同条件下刺激培养，分别于8、24、48和72 h流式细胞术检测细胞活性情况；用包含小鼠CD19抗体的scFv质粒转染Plat-E细胞，包装逆转录病毒后感染活化的CD3 +T细胞，制备鼠特异性的CD19嵌合抗原受体T细胞（mCD19 CAR-T）。mCD19 CAR-T细胞在体外与B淋巴瘤细胞株A20细胞共培养，利用流式细胞术检测其对A20细胞的靶向杀伤效果；建立淋巴瘤小鼠模型，体内输注mCD19 CAR-T细胞，检测CAR-T细胞的体内杀伤和分布情况。 结果:包被抗CD3/CD28抗体的刺激活化效果最佳，且在刺激后24～48 h具有较好的细胞活性；抗mCD19的逆转录病毒感染CD3 + T细胞效率[（32.27±7.56）%]稳定，制备的mCD19 CAR-T细胞可特异性杀伤A20肿瘤细胞，48 h时A20细胞凋亡率为24.3%；体内检测发现输注mCD19 CAR-T细胞第6天即可检测到脾脏中CD19 +细胞比例[（1.83±0.58）%]显著降低，到建模后第12天骨髓和脾脏中CD19 +细胞清除更为显著，与A20细胞组相比差异具有统计学意义[脾脏：（0.36±0.04）%对（47.00±13.46）%， P<0.001；骨髓：（1.82±0.29）%对（37.30±1.44）%， P<0.0001]。且mCD19 CAR-T细胞在外周血、脾脏和骨髓中均有分布，GFP +CD3 + CAR-T细胞比例分别为（2.90±1.12）%、（4.96±0.80）%、（13.55±1.56）%，以骨髓中占比最高。 结论:获得优化的CD3 + T细胞活化刺激体系和最佳感染时间，稳定构建了抗mCD19 CAR-T细胞，并在体内外验证其具备良好的杀伤能力。
文献关键词：
CD19;嵌合抗原受体T细胞;B细胞淋巴瘤
中图分类号：
作者姓名：
任春晓;陈娴娴;赵莉;田宇;徐开林;赵恺
作者机构：
徐州医科大学血液病研究所、江苏省骨髓干细胞重点实验室、徐州医科大学附属医院血液科，徐州 221000
文献出处：
引用格式：
[1]任春晓;陈娴娴;赵莉;田宇;徐开林;赵恺-.CD19嵌合抗原受体T细胞制备条件优化及其体内外杀伤作用研究)[J].中华血液学杂志,2022(06):506-512
A类：
mCD19,GFP ,+CD3
B类：
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AB值：
0.202717
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