目的:探讨肾脑蛋白(kidney brain protein，KIBRA)下调在慢性脑低灌注所致认知功能障碍中的作用和机制。方法:90只雄性SPF Sprague Dawley (SD)大鼠，按照随机数字表法分为四组：假手术组( n＝15)、慢性脑低灌注组(2VO组， n＝25)、慢性脑低灌注脑立体定位注射AAV-KIBRA组(2VO+AAV-KIBRA组， n＝25)、慢性脑低灌注脑立体定位AAV-vector组(2VO+AAV-vector组， n＝25)。采用双侧结扎颈总动脉方法建立慢性脑低灌注模型，脑立体定位注射2 μL AAV-KIBRA或AAV-vector，观察30 d。利用Morris水迷宫、离体电生理、p21激活的蛋白激酶3(p21-activated kinase 3，PAK3)酶活性检测、蛋白印迹、免疫共沉淀和Golgi染色方法，分别检测大鼠的空间学习记忆能力、长时程增强(long-term potentiation，LTP)、KIBRA水平表达、PAK3酶活性的变化，并观察树突棘的分布。用SPSS 16.0统计软件分析实验数据，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较各组间差异，采用LSD检验进行两组间数据差异显著性比较，方差不齐则采用Welch检验。 结果:大鼠慢性脑低灌注1月后，取大鼠海马进行匀浆和蛋白印迹检测KIBRA水平，发现2VO组KIBRA水平较假手术组明显下降[(73.49±4.12)%]( P<0.01)，海马CA1区注射AAV-KIBRA显著上调KIBRA水平[(91.91±7.01)%]( P<0.01)。Morris水迷宫检测发现：2VO组大鼠在7 d的平台位置学习训练中的潜伏期[第3~7天学习结果：(48.18±2.82)s、(43.45±2.27)s、(32.27±2.22)s、(26.55±2.37)s、(17.18±2.67)s]显著长于假手术组[(41.67±2.74)s、(32.58±2.57)s、(22.50±2.94)s、(16.91±2.39)s、(8.75±1.52)s](均 P<0.05)，2VO+AAV-KIBRA组在7 d的平台位置学习潜伏期[第3~7天分别为：(43.83±2.95)s、(35.25±2.15)s、(26.58±2.03)s、(19.92±2.17)s、(17.75±1.35)s]显著短于2VO组(均 P< 0.01)。撤除平台的Morris水迷宫检测，短期记忆结果显示2VO组大鼠达到平台区域的潜伏期显著长于假手术组，而2VO+AAV-KIBRA组大鼠到达平台潜伏期显著短于2VO组( P<0.01)。同时2VO大鼠的平台区域滞留时间和穿梭次数均少于假手术组( P<0.01)，而2VO+AAV-KIBRA组的平台区域滞留时间和穿梭次数则显著多于2VO组( P<0.01)。离体脑片电生理记录显示：高频刺激后，2VO组相对兴奋性突触后场电位(1.43±7.43)显著低于假手术组(2.21±6.54)，而2VO+AAV-KIBRA组相对兴奋性突触后场电位(1.90±8.15)高于2VO组( P<0.01)。大鼠海马组织进行免疫共沉淀发现沉淀KIBRA时，蛋白免疫印迹实验可以检测到PAK3。PAK3酶活性检测结果显示：2VO海马组织PAK3的相对酶活性(0.64±0.04)显著低于假手术组(1.02±0.07)，而2VO+AAV-KIBRA组PAK3的相对酶活性(0.86±0.03)显著高于2VO组。Golgi染色显示：2VO海马神经元树突棘密度[(6.85±0.43)个/10 μm]显著低于假手术组[(11.83±0.58)个/10 μm]，而2VO+AAV-KIBRA组神经元树突棘密度[(10.22±0.39)个/10 μm]显著高于2VO组。 结论:慢性脑低灌注后KIBRA下降在认知功能障碍中发挥重要作用，与突触功能可塑性下降有关，KIBRA下调通过调控PAK3活性而参与树突的结构可塑性。因此，KIBRA可能是防治慢性脑低灌注认知功能的重要靶点。

慢性脑低灌注;肾脑蛋白;认知功能障碍;突触可塑性;神经机制

潘剑珍;杨丽洁;沈秉正;梅俊华;姚朝辉

武汉大学人民医院老年病科，武汉　430060;武汉大学人民医院药学部，武汉　430060

中华行为医学与脑科学杂志

[1]潘剑珍;杨丽洁;沈秉正;梅俊华;姚朝辉-.肾脑蛋白介导的突触可塑性下降在慢性脑低灌注认知功能障碍中的作用及机制)[J].中华行为医学与脑科学杂志,2022(10):910-917

肾脑蛋白,KIBRA,2VO+AAV,PAK3

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