典型文献
多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因
文献摘要：
本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术，并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间，于陆军军医大学第一附属医院检验科，针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rpsL43（AAG?AGG），分别设计锁式探针（padlock probe，PLP）、引物和捕获探针，构建了基于磁珠的固相RCA恒温扩增反应体系，并进行了实验参数的优化。通过多色荧光探针（Cy3/Cy5/ROX）对RCA产物精准捕获与信号放大，实现了对3种突变基因的单管多重检测。进一步对该方法的灵敏度、特异性与线性范围等分析性能进行验证，结果显示同一反应体系中katG315的响应范围为1.0 pmol/L至0.1 nmol/L，rpoB531和rpsL43的响应范围为1.0 pmol/L至50.0 pmol/L和1.0 pmol/L至20.0 pmol/L，且该方法具有较好的特异度与灵敏度，在混合靶标中可精确识别单碱基突变，最低检出限低至1.0 pmol/L；在模拟血清样本的回收实验中，回收率可达95.0%~105.2%。综上，本研究构建的恒温扩增型多重检测方法可快速实现3种耐药突变位点的单管多重检测，该技术成本低廉、简便快速、不依赖大型设备，为病原体耐药基因检测提供了一种新的分析方法。
文献关键词：
结核分枝杆菌;耐药性;荧光;滚环扩增;多重检测
中图分类号：
作者姓名：
夏珂;李梦雅;田晖艳;黄国荣;谢凤欣;张阳;府伟灵
作者机构：
陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038;重庆大学附属肿瘤医院检验科，重庆 400030
文献出处：
引用格式：
[1]夏珂;李梦雅;田晖艳;黄国荣;谢凤欣;张阳;府伟灵-.多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因)[J].中华预防医学杂志,2022(01):56-62
A类：
rpoB531,rpsL43,padlock
B类：
多色荧光,荧光探针,滚环扩增,结核分枝杆菌,RCA,超灵,生物传感技术,结核杆菌,多重检测,陆军,军军,军医大学,医院检验科,异烟肼,利福平,链霉素,基因突变位点,katG315,AGC,ACC,CAC,TAC,AAG,AGG,probe,PLP,引物,磁珠,恒温扩增,反应体系,Cy3,Cy5,ROX,信号放大,突变基因,单管,线性范围,分析性能,响应范围,pmol,nmol,靶标,精确识别,单碱基突变,低检出限,检出限低,血清样本,研究构建,快速实现,耐药突变位点,不依,大型设备,病原体,耐药基因检测,耐药性
AB值：
0.367554
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