典型文献
重组细菌多药外排泵AcrAB-TolC的转运功能和动态组装
文献摘要：
[背景]多药外排泵多以膜蛋白复合体形式存在,是导致细菌耐药性的重要原因.外排泵的转运功能和组装过程对于细菌耐药性和药物研发具有重要意义.[目的]以多药外排泵耐药结节细胞分化家族(resistance-nodulation-division family,RND)的重要成员AcrAB-TolC复合体为对象,研究其转运活性和体外组装特性.[方法]基于大肠杆菌AcrAB-TolC复合体基因序列,分别构建含有acrA、acrB、tolC基因的重组质粒,表达和纯化复合体各亚基,利用荧光光谱、等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)等技术分析复合体及亚基的转运功能、亚基与底物的相互作用,以及亚基间的相互作用和动态装配.[结果]实现了 AcrAB-TolC复合体各组分的表达和纯化(纯度＞98％),证实表达有各组分的活细胞提高了对于溴化乙锭(ethidium bromide,EB)的转运活性,并发现群体感应效应信号分子N-hexanoyl-L-homoserine lactone(C6-HSL)能够抑制AcrB、TolC对于EB的转运活性.ITC结果进一步证实了 C6-HSL与AcrB、TolC的相互作用.ITC结果还显示AcrA分别与AcrB、TolC之间存在明显的相互作用,而AcrB与TolC之间无明显的相互作用.在体外装配实验中观测到AcrAB-TolC亚基的单分子荧光强度随时间增加,证实了复合体亚基在膜上的动态组装过程.[结论]实现了 AcrAB-TolC外排泵及亚基的表达和纯化,证实了AcrAB-TolC对底物的转运活性及与底物的相互作用,观察到AcrAB-TolC的动态组装过程.以上结果为研究多药外排泵导致的细菌耐药性及抗菌策略具有重要意义.
文献关键词：
细菌耐药性;耐药结节细胞分化家族;AcrAB-TolC;C6-HSL;等温滴定量热法;荧光;动态组装
中图分类号：
作者姓名：
蒋嘉峰;肖澜;谢浩;沈雷;陈自忍
作者机构：
武汉理工大学化学化工与生命科学学院,湖北武汉430070
文献出处：
引用格式：
[1]蒋嘉峰;肖澜;谢浩;沈雷;陈自忍-.重组细菌多药外排泵AcrAB-TolC的转运功能和动态组装)[J].微生物学通报,2022(11):4617-4628
A类：
TolC,耐药结节细胞分化家族,hexanoyl,AcrA
B类：
多药,外排泵,AcrAB,运功,动态组装,膜蛋白,复合体,细菌耐药性,组装过程,药物研发,resistance,nodulation,division,family,RND,转运活性,大肠杆菌,基因序列,acrA,acrB,tolC,重组质粒,亚基,荧光光谱,等温滴定量热法,isothermal,titration,calorimetry,ITC,底物,活细胞,溴化乙锭,ethidium,bromide,EB,群体感应,信号分子,homoserine,lactone,C6,HSL,AcrB,单分子,分子荧光,荧光强度,抗菌策略,略具
AB值：
0.255574
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