目的 探讨地塞米松(DEX)对实验性脑型疟(ECM)小鼠的免疫保护作用.方法 将C57BL/6小鼠随机分为感染组、DEX治疗组和对照组,每组20只.感染组和DEX治疗组小鼠经腹腔注射1×106个伯氏疟原虫ANKA感染红细胞,对照组小鼠不作任何处理.DEX治疗组小鼠在感染后第1、2天腹腔注射地塞米松磷酸钠(80mg/kg)进行治疗,对照组和感染组则注射等体积生理盐水.感染后第3天起,取感染小鼠尾静脉血制备血涂片,吉氏染色后计数感染红细胞,观察原虫血症变化情况.每日记录小鼠的存活和与ECM相关的神经体征.感染后第3、5天,取小鼠脾脏制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾Th1细胞,调节性T细胞(Tregs),表达程序性死亡受体-1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)的CD4+T细胞以及M1、M2型巨噬细胞的变化情况.取脾细胞悬液体外培养48 h后取上清,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-10等促炎/抑炎相关因子的分泌水平.感染后第6天,伊文思蓝(EB)染色法评价DEX治疗后对小鼠血脑屏障的影响.流式细胞术和细胞因子检测结果的比较采用One-way ANOVA检验,小鼠原虫血症比较采用独立样本t检验,生存率的比较采用Log-Rank检验.结果 感染后第3天,感染组和DEX治疗组小鼠外周血开始出现疟原虫感染红细胞,感染后第9天的原虫血症分别为(25.89±1.97)％和(22.91±3.21)％,二者差异无统计学意义(t=1.12,P＞0.05).感染组小鼠在感染后第6天开始出现死亡,伴有ECM神经症状,感染后第9天全部死亡;DEX治疗组小鼠在感染后第8天出现死亡,伴有ECM神经症状,第10天全部死亡.与感染组比较,DEX治疗延缓了脑型疟的发生(x2=4.31,P＜0.05).感染后第3、5天,DEX治疗组小鼠表达PD-1的脾CD4+T 细胞比例分别为(18.10±0.52)％和(39.13±0.91)％,高于对照组的(11.53±1.00)％和(13.72±1.78)％以及感染组的(14.87±1.02)％和(35.87±0.74)％(F=41.41、378.00,P＜0.05、0.01);表达CTLA-4的脾CD4+T细胞比例分别为(3.05±0.12)％和(8.70±1.01)％,高于对照组的(0.28±0.02)％和(0.45±0.10)％以及感染组的(0.44±0.13)％和(0.68±0.13)％(F=730.20、191.80,P＜0.01).感染后第3、5天,DEX治疗组小鼠脾细胞中Th1细胞的比例分别为(0.14±0.04)％和(0.63±0.06)％,低于感染组的(0.30±0.06)％和(0.80±0.04)％(F=10.93、56.58,P＜0.05、0.01).感染后第 5 天,DEX 治疗组小鼠脾细胞中Tregs细胞的比例为(1.30±0.08)％,高于对照组的(1.12±0.08)％和感染组的(0.86±0.03)％(F=36.51,P＜0.01).感染后第3天,DEX治疗组小鼠脾细胞中M1型巨噬细胞的比例为(0.43±0.12)％,低于感染组的(1.03±0.14)％(F=29.81,P＜0.01).感染后第5天,DEX治疗组小鼠脾细胞中M2型巨噬细胞比例为(1.56±0.20)％,高于对照组的(0.49±0.04)％和感染组的(0.87±0.06)％(F=60.21,P＜0.01).感染后第3、5天,DEX治疗组小鼠脾细胞培养上清中TNF-α水平分别为(140.18±27.38)和(328.23±75.70)pg/ml,低于感染组的(247.34±35.34)和(650.88±43.56)pg/ml(F=11.70、32.09,P＜0.01);IL-6 水平分别为(40.03±9.09)和(1 270.52±83.75)pg/ml,低于感染组的(511.97±41.70)和(4 131.31±645.16)pg/ml(F=299.40、93.11,P＜0.01);IL-10 的水平分别为(283.06±44.83)和(592.63±51.69)pg/ml,高于感染组的(118.82±8.47)和(424.49±51.44)pg/ml(F=36.04、73.95,P＜0.01).感染后第6天,感染组小鼠的血脑屏障破坏严重,EB渗入脑组织,呈现深蓝色;对照组小鼠血脑屏障完好,未见明显的EB渗入;DEX治疗组小鼠仅有少量EB渗入脑组织.结论 在ECM小鼠中,DEX通过提高CD4+T细胞表面免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的水平调控Th1和Tregs细胞活化与应答强度,促进M1向M2型巨噬细胞极化,抑制促炎因子的分泌水平,减轻ECM小鼠血脑屏障的损伤,从而降低ECM的致病性.

疟疾;地塞米松;脾脏;促炎症反应

黄媛媛;姚世杰;卞致芳;温易鑫;郑丽;曹雅明

中国医科大学基础医学院免疫学教研室,沈阳 110122

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

[1]黄媛媛;姚世杰;卞致芳;温易鑫;郑丽;曹雅明-.地塞米松对实验性脑型疟小鼠的免疫保护作用)[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2022(04):446-453

ANKA

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