目的 探讨温肺化纤汤治疗特发性肺纤维化(IPF)其可能机制.方法 梯度密度离心法分离提取C57BL/6小鼠肺间充质干细胞(LMSCs).体外培养LMSCs,采用不同浓度(100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L)的过氧化氢(H202)诱导细胞损伤,MTT法检测LMSCs细胞存活率,选择细胞存活率约为50％的H2O2损伤浓度进行后续试验.细胞分为正常对照组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤组设浓度为1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml,MTT法检测温肺化纤汤的毒性.细胞分为正常对照组、模型组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤设浓度为1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml,根据剂量最小化和疗效最大化的原则,结合细胞存活率确定药物的最佳浓度用于后续试验.实验分为正常对照组、模型组、阳性对照组及温肺化纤汤低、中、高剂量组.除正常对照组外,模型组和温肺化纤汤各剂量组分别在温肺化纤汤预处理24h后均给予H2O2造模6h.造模结束后检测细胞上清中葡萄糖摄取量及乳酸水平,RT-PCR检测有氧糖酵解相关酶己糖激酶2 (HK2)、丙酮酸激酶2(PKM2) mRNA水平.结果 600 μmol/L H2O2作用于LMSCs 6h,细胞的存活率为(52.17±0.82)％,并作为后续氧化应激损伤模型的浓度.与正常对照组比较,不同浓度的温肺化纤汤(25～1600 μg/ml)对LMSCs均无毒性作用(P＞0.05).与模型组比较,不同浓度(25～1600 μg/ml)温肺化纤汤预处理的LMSCs存活率均显著增加(P＜0.01);按4倍设定等比浓度梯度,采取终浓度为25、100、400 μg/ml温肺化纤汤作为低、中、高剂量组的干预浓度.与正常对照组相比,模型组LMSCs氧化应激损伤后导致葡萄糖摄取量和乳酸含量降低(P＜0.01),有氧糖酵解相关酶HK2和PKM2 mRNA水平均下降(P＜0.05).与模型组对比较比,温肺化纤汤各剂量组均可增强葡萄糖摄取量和乳酸的水平(P＜0.05),且温肺化纤汤中、高剂量(100、400 μg/ml)则增强了HK2、PKM2 mRNA表达(P＜0.01).与阳性对照组比较,温肺化纤汤高剂量组葡萄糖摄取量、乳酸含量均升高(P＜0.05).与温肺化纤汤低剂量组比较,温肺化纤汤中、高剂量组的HK2、PKM2 mRNA水平均明显增高(P＜0.05).结论 温肺化纤汤可能通过增强LMSCs的有氧糖酵解改善H2O2诱导的细胞氧化应激损伤,从而治疗IPF.

特发性肺纤维化;肺间充质干细胞;氧化应激损伤;温肺化纤汤;有氧糖酵解

莫丽莎;邱明亮;朱国双;朱伟;刘良徛

江西中医药大学附属医院,江西省南昌市八一大道445号,330006;江西中医药大学中医学院;广州中医药大学第二临床医学院

中医杂志

[1]莫丽莎;邱明亮;朱国双;朱伟;刘良徛-.温肺化纤汤对过氧化氢诱导的肺间充质干细胞氧化应激损伤模型有氧糖酵解功能的影响)[J].中医杂志,2022(03):262-268

温肺化纤汤,肺间充质干细胞,LMSCs

氧化应激损伤,损伤模型,有氧糖酵解,特发性肺纤维化,IPF,可能机制,梯度密度,离心法,分离提取,C57BL,体外培养,H202,细胞损伤,MTT,细胞存活率,H2O2,正常对照,ml,测温,最佳浓度,阳性对照,高剂量,24h,6h,上清,中葡,葡萄糖摄取,摄取量,己糖激酶,HK2,丙酮酸激酶,PKM2,无毒性,毒性作用,浓度梯度,酸含量,含量降低

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