目的 观察回阳生肌膏对过氧化氢(H2O2)诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)功能损伤的影响.方法 通过密度梯度离心法联合差速贴壁法提取、分离、培养小鼠骨髓EPCs,观察细胞形态及采用FITC标记的荆豆凝集素-1联合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)双摄取法鉴定EPCs.制备回阳生肌膏水提取物,采用细胞增殖/毒性试剂盒(CCK-8)筛选出最大无毒质量浓度(C).针对回阳生肌膏水提取物进行化学成分定性分析.以0.12 mL/L H2 O2刺激EPCs模拟糖尿病足溃疡氧化应激状态建立模型,将细胞密度调整至5×108 L-1,分别种于培养板,5孔为1组.将细胞分为空白对照组,模型组,回阳生肌膏高、中、低剂量组.空白对照组与模型组不予干预,各给药组分别予回阳生肌膏水提取物高剂量(C)、中剂量(C/2)、低剂量(C/4).采用CCK-8法、Transwell实验、小管形成实验分别检测细胞的增殖、迁移、小管形成功能,酶联免疫吸附测定(ELISA)及硝酸还原酶法分别检测细胞上清液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、一氧化氮(NO)的表达情况.结果 提取的EPCs诱导培养至第7天经鉴定细胞为小鼠骨髓EPCs.确定C为50 mg/L,回阳生肌高、中、低剂量组的剂量分别为50、25、12.5 mg/L.回阳生肌膏水提取物中共有黄芪甲苷、人参皂苷、肉桂醛等35种成分.与空白对照组比较,模型组OD值降低(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.05),小管形成数量减少、总分支长度缩短(P<0.01),VEGF、SDF-1α、NO含量均降低(P<0.01);回阳生肌膏中、低剂量组OD值均升高(P<0.01),回阳生肌膏中剂量组迁移细胞数增多(P<0.01),VEGF、SDF-1α含量均降低(P<0.05,P<0.01),回阳生肌膏低剂量组VEGF、SDF-1α、NO含量均降低(P<0.01).与模型组比较,回阳生肌膏高、中、低剂量组OD值均升高(P<0.01),小管形成数量均增多(P<0.01),SDF-1α含量均升高(P<0.01);回阳生肌膏高、中剂量组迁移细胞数均增多(P<0.01),总分支长度延长(P<0.05,P<0.01),VEGF、NO含量均升高(P<0.01).结论 回阳生肌膏水提取物应用于氧化应激下的EPCs可以有效修复细胞受损的增殖、迁移、小管形成功能,促进EPCs积极发挥增殖、迁移、血管新生作用,可能与其上调VEGF、SDF-1α、NO的表达有关.

回阳生肌膏;内皮祖细胞;增殖;迁移;血管新生;小鼠

周敏;吴黎;谭崇赋;徐旭英

首都医科大学附属北京中医医院 北京 100010;北京市上地医院;北京中医药大学;首都医科大学

北京中医药大学学报

[1]周敏;吴黎;谭崇赋;徐旭英-.回阳生肌膏抗小鼠骨髓内皮祖细胞功能损伤的研究)[J].北京中医药大学学报,2022(01):41-52

回阳生肌膏

髓内,内皮祖细胞,细胞功能,功能损伤,H2O2,EPCs,过密,密度梯度离心法,差速,贴壁,细胞形态,FITC,凝集素,Dil,乙酰化,低密度脂蛋白,ac,LDL,摄取,取法,水提取物,试剂盒,CCK,无毒,毒质,糖尿病足溃疡,氧化应激状态,建立模型,细胞密度,别种,空白对照,不予,药组,高剂量,Transwell,细胞的增殖,酶联免疫吸附测定,硝酸还原酶,酶法,上清液,血管内皮细胞生长因子,VEGF,基质细胞衍生因子,SDF,一氧化氮,诱导培养,黄芪甲苷,人参皂苷,肉桂醛,OD,分支长度,血管新生

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