目的 利用RNA干扰技术建立多巴胺D2受体(D2R)低表达的高催乳素大鼠垂体瘤MMQ细胞模型.方法 设计3对可沉默D2R基因表达的小干扰RNA(siRNA)序列,转染MMQ细胞,建立包括siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、阴性对照(siNT)组和空白对照(CTRL)组的5组细胞模型,采用Western blot法检测各组MMQ细胞D2R蛋白表达.选择干扰高表达细胞株,加入溴隐亭1μmol/L进行干扰,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、Western blot法及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别观察干扰后MMQ细胞催乳素的分泌、催乳素蛋白相对表达量及催乳素mRNA水平.结果 5组D2R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(F=19.936,P<0.01);其中siRNA1组、siRNA3组D2R蛋白相对表达量[(0.23±0.12)、(0.57±0.24)]与siNT组(0.81±0.24)、CTRL组(0.94±0.21)比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);siRNA1组、siRNA3组对MMQ细胞的D2R蛋白表达抑制率分别为74％和35％.干扰后,siRNA组、CTRL组、siNT组MMQ细胞催乳素分泌、催乳素蛋白相对表达量、催乳素mRNA水平比较,差异均有统计学意义(F=10.898、7.485、7.898,均P<0.05);siRNA组催乳素分泌高于siNT组、CTRL组[(2.91±0.12)ng/ml比(2.14±0.15)、(2.09±0.44)ng/ml];siRNA组催乳素蛋白相对表达量高于siNT组、CTRL组[(0.99±0.67)比(0.85±0.13)、(0.82±0.12)];siRNA组催乳素mRNA水平高于siNT组、CTRL组[(1.00±0.07)比(0.69±0.09)、(0.73±0.14)],差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 基于RNA干扰技术构建的D2R低表达的高催乳素MMQ细胞模型为目标药物治疗高催乳素血症的靶点研究提供了可靠的细胞模型.

高催乳素血症;RNA干扰;受体;多巴胺D2;MMQ细胞

张志洋;徐志卿;刘丽娜;薄奇静;王传跃

100088 首都医科大学附属北京安定医院 国家精神心理疾病临床医学研究中心 精神疾病诊断与治疗北京市重点实验室 北京脑重大疾病研究院精神分裂症研究所;100069 北京,首都医科大学人脑保护高精尖创新中心;100069 首都医科大学神经生物学系 神经再生修复研究北京市重点实验室

神经疾病与精神卫生

[1]张志洋;徐志卿;刘丽娜;薄奇静;王传跃-.基于RNA干扰技术的多巴胺D2受体低表达的高催乳素MMQ细胞模型构建)[J].神经疾病与精神卫生,2022(07):463-467

siNT

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