典型文献
hnRNPU基因敲减小鼠preB A70细胞株的构建及鉴定
文献摘要：
目的 构建shRNA-不均一核糖核蛋白U(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U,hnRNPU)慢病毒表达载体以及hnRNPU基因稳定敲减的小鼠preB A70细胞株.方法 将靶向小鼠hnRNPU基因的shRNA干扰序列连接入pLKO.1-EBFP-PURO质粒中,测序检测.将构建成功的pLKO.1-hnRNPU shRNA-EBFP-PURO和慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清.将病毒上清感染A70细胞,利用倒置荧光显微镜观察病毒感染情况,利用Western blot检测hnRNPU蛋白的表达.通过有限稀释方法,构建单细胞克隆,并利用Western blot筛选hnRNPU基因稳定敲减的A70细胞株.结果 成功构建了shRNA-hnRNPU慢病毒表达载体.表达shRNA-hnRNPU的慢病毒在HEK293T细胞中完成包装.包装好的病毒感染A70细胞72 h后,细胞内可以观察到蓝色荧光.感染后的细胞经过嘌呤霉素筛选后,细胞内的hnRNPU蛋白大约减少一半.通过有限稀释方法,构建了hnRNPU基因稳定敲减的细胞株.结论 本研究成功构建了hnRNPU稳定敲减的A70细胞株,为后续研究hnRNPU在早期B细胞发育中的作用奠定了实验基础.
文献关键词：
不均一核糖核蛋白U;基因敲减;细胞株;构建;鉴定
中图分类号：
作者姓名：
张岱权;黄黎;金棕杰;唐诗琪;罗佳瑞;李林;赵雷;曹新梅
作者机构：
西南医科大学附属医院中医科 泸州646000;西南医科大学基础医学院重大疾病的免疫机制及治疗泸州市重点实验室 泸州646000;西南医科大学基础医学院 泸州646000
文献出处：
引用格式：
[1]张岱权;黄黎;金棕杰;唐诗琪;罗佳瑞;李林;赵雷;曹新梅-.hnRNPU基因敲减小鼠preB A70细胞株的构建及鉴定)[J].西南医科大学学报,2022(06):484-487
A类：
hnRNPU,preB,A70,EBFP
B类：
基因敲减,细胞株,shRNA,不均一核糖核蛋白,heterogeneous,nuclear,ribonucleoprotein,慢病毒表达载体,pLKO,PURO,质粒,慢病毒包装,共转染,HEK293T,上清,倒置,荧光显微镜观察,感染情况,blot,有限稀释,单细胞,细胞克隆,装好,蓝色,嘌呤霉素,细胞发育
AB值：
0.191046
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