目的 比较超滤浓缩法、差速离心法提取细菌外膜囊泡(OMVs)的效率,并观察两种方法提取的OMVs对细胞存活率影响的差异.方法 分别采取超滤浓缩法和差速离心法提取大肠埃希菌(E.coli)的OMVs,BCA法检测两种方法提取的OMVs蛋白浓度;负染电镜检测其形态及纯度;纳米颗粒跟踪分析检测OMVs粒径大小分布和浓度;CCK8法检测OMVs对细胞存活率的影响.结果 两种方法提取的OMVs均为形态典型的球状囊泡结构,差速离心法提取的OMVs的存在包膜不完整,有缺口的情况,产量为(2.7±0.1)μg/1010CFU;超滤浓缩法提取OMVs的产量为(3.3±0.3)μg/1010CFU,高于差速离心法(P<0.05);差速离心法提取的OMVs直径<247.5 nm囊泡数量占总量(82.3±4.6)％,超滤浓缩法提取的OMVs平均粒径更加集中,直径<247.5 nm的囊泡数量占总量(88.8±3.7)％,占比更高(P<0.05);CCK8法检测发现两种方法提取的OMVs均对RAW 264.7细胞存活率产生影响(P均<0.05),差速离心法和超滤浓缩法提取的OMVs作用后,细胞存活率分别为(84.0±4.6)％和(74.1±6.6)％,组间无显著性差异(P>0.05).结论 超滤浓缩法提取的E.coli的OMVs的完整性、纯度和产量均高于差速离心法,具有更高的提取效率,两种方法提取的OMVs对细胞存活率的影响无差异.

大肠埃希菌;外膜囊泡;超滤浓缩;差速离心

陈光璋;范芳芳;梁坤鹏;韦莉

感染与免疫安徽省重点实验室;蚌埠医学院第二附属医院检验科;蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽 蚌埠233030

牡丹江医学院学报

[1]陈光璋;范芳芳;梁坤鹏;韦莉-.基于超滤浓缩法和差速离心法制备细菌OMVs的方法探讨)[J].牡丹江医学院学报,2022(06):9-13

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