目的:探讨Cereblon(CRBN)对沙利度胺抑制人肺癌A549细胞及人肝癌HepG2细胞分泌VEGF/bFGF的影响.方法:采用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立稳定敲低CRBN的A549细胞系(A549 CRBN)及HepG2细胞系(HepG2CRBN)并通过实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质印记(Western blot)实验验证.将A549细胞分为阴性对照组(A549luciferase)、CRBN低表达组(A549CRBN);HepG2细胞分为阴性对照组(HepG2luciferase)、CRBN低表达组(HepG2CRBN),以上细胞按照3×105 cells/well接种到6孔板中,放入37℃,5％CO2的培养箱中培养24 h,分别加入1 ml含100μmol/L沙利度胺(thalidomide组)和1 ml 1‰DMSO(control组)的培养液,继续培养24 h再行后续实验,每组设计3个复孔.MTS法检测沙利度胺对细胞增殖的影响;Real-time PCR检测VEGF、bFGF、c-jun mRNA表达,ELISA法检测VEGF、bFGF蛋白表达.结果:与对照组比较,沙利度胺在浓度为1、10、50、100μmol/L时对A549及HepG2细胞的增殖能力无显著影响(P>0.05).与A549CRBN或HepG2CRBN组比较,A549luciferase及HepG2luciferase组分泌的VEGF及bFGF均显著降低(P<0.05).与A549luciferase或HepG2luciferase细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制A549luciferase和HepG2luciferase细胞的VEGF和bFGF的表达(P<0.05),而对A549CRBN和HepG2CRBN细胞中VEGF和bFGF的表达无显著抑制作用;与HepG2luciferase细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制HepG2luciferase细胞的c-Jun表达(P<0.01),而对HepG2CRBN细胞的c-Jun表达无显著抑制作用.结论:沙利度胺对A549和HepG2细胞VEGF和bFGF表达的抑制作用可能是通过CRBN介导的,而c-Jun可能是抑制作用的关键转录因子之一.

沙利度胺;血管新生;细胞培养;血管内皮生长因子 (VEGF);碱性成纤维细胞生长因子 (bF-GF);cereblon (CRBN)

黄海宁;汪汇;龙超良;张浩;汪海

济宁医学院附属医院,山东 济宁272029;北京赛德维康医药研究院,北京100039;中国人民解放军总医院,北京100853;江苏师范大学健康科学学院,徐州221116

中国应用生理学杂志

[1]黄海宁;汪汇;龙超良;张浩;汪海-.沙利度胺抑制肿瘤细胞分泌VEGF/bFGF机制的探讨)[J].中国应用生理学杂志,2022(02):169-174

Cereblon,CRBN,HepG2CRBN,A549luciferase,A549CRBN,HepG2luciferase,thalidomide,cereblon

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