目的 探讨LIM结构域2(LIMD2)对食管癌细胞增殖、凋亡的影响,及其对细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调控作用.方法 取10例食管癌患者癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LIMD2 mRNA表达,采用免疫荧光染色检测LIMD2蛋白表达,采用Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达.取人食管癌细胞(KYSE30、EC9706)和人正常食管上皮细胞(HEEC),采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达,筛选出LIMD2 mRNA及蛋白表达最高的EC9706细胞进行后续试验.取EC9706细胞,分为对照组(常规培养)、Si-LIMD2组(转染LIMD2干扰序列的腺病毒载体)、Si-NC组(转染不含LIMD2干扰序列的空腺病毒载体)、PD98059组(ERK/MAPK通路阻断剂)、ISO组(ERK/MAPK通路激活剂)、Si-LIMD2+ISO组(在Si-LIMD2组基础上加入ISO溶液);采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;采用Western blot法检测细胞ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK、细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK2、caspase-3、整合素β1、黏着斑激酶(FAK)、整合素连接激酶(ILK)表达.结果 LIMD2 mRNA及蛋白在食管癌组织及KYSE30细胞、EC9706细胞中的表达均较高,且在EC9706细胞中的表达高于KYSE30细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白在食管癌组织中表达较高(P<0.05).与对照组相比,Si-LIMD2组和PD98059组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较低,增殖活性较低,G0/G1期比例较高,S期及G2/M期比例较低,凋亡率较高,cyclin D1、CDK2蛋白表达较低,caspase-3蛋白表达较高,差异均有统计学意义(P<0.05),ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Si-LIMD2组相比,Si-LIMD2+ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 沉默LIMD2基因表达可能通过抑制ERK/MAPK磷酸化途径激活而抑制食管癌细胞增殖、促进其凋亡.

LIM结构域2;食管癌细胞;细胞外信号调节激酶;丝裂原活化蛋白激酶;增殖;凋亡

李险波;张志强;韩小勇;甄志鹏;李焕芬;赵钦

保定市第一中心医院胸外科,河北保定071000;河北省人民医院胸外科,河北石家庄050051

局解手术学杂志

[1]李险波;张志强;韩小勇;甄志鹏;李焕芬;赵钦-.LIMD2基因表达对食管癌细胞增殖、凋亡及ERK/MAPK信号通路的影响)[J].局解手术学杂志,2022(08):669-675

LIMD2,LIMD2+ISO

食管癌细胞,结构域,细胞外信号调节激酶,丝裂原活化蛋白激酶,食管癌患者,癌旁组织,组织标本,qRT,免疫荧光染色,blot,ERK1,p38MAPK,人食管癌,KYSE30,EC9706,上皮细胞,HEEC,规培,Si,转染,腺病毒载体,NC,PD98059,阻断剂,激活剂,CCK,细胞增殖活性,流式细胞术,细胞周期,凋亡率,cyclin,D1,CDK2,caspase,黏着斑激酶,FAK,整合素连接激酶,ILK,食管癌组织,组织中表达,白及,G0,G1,G2,磷酸化

0.162318