目的 探讨前列腺素D2(prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)的调控作用及其机制.方法 将胃癌细胞SGC-7901通过无血清培养法富集GCSC.通过流式细胞术检测SGC-7901和无血清培养富集的GCSC中干性标志物乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)和CD44的阳性率,Western blot检测SGC-7901和无血清培养富集的GCSC中干性标志物锌指蛋白转录因子4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)和CD44的蛋白表达以验证富集的GCSC是否满足后续实验需要.将不同浓度的PGD2(2.5,5,7.5,10,15μg/ml)作用于富集的GCSC,通过CCK-8实验检测半数抑制浓度(IC50)作为后续实验PGD2给药浓度.将富集的GCSC分为3组:空白组、DMSO组和PGD2组.通过CCK-8、平板克隆、Transwell实验检测PGD2对GCSC增殖、侵袭能力的影响,流式细胞术检测PGD2对GCSC凋亡能力的影响.通过Western blot技术检测PGD2刺激后,GCSC中侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)、肿瘤干细胞干性标志物(SALL4、CD44)的表达以及JAK2/STAT3通路相关蛋白(磷酸化JAK2、磷酸化STAT3)的调控情况.结果 流式细胞术结果显示与胃癌细胞SGC-7901相比,无血清培养富集的GCSC中干性标志物ALDH1和CD44表达增加(P<0.05),Western blot结果显示无血清培养富集的GCSC中干性标志物SALL4、CD44表达上调(P<0.05),表明GCSC富集成功,满足后续实验需要.CCK-8实验结果显示PGD2对GCSC具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,PGD2的IC50为8μg/ml,选择PGD2(8μg/ml)作为后续实验条件.CCK-8、平板克隆和Transwell实验表明,与空白组和DMSO组相比,PGD2组GCSC增殖及侵袭能力下降(P<0.01).流式细胞术结果显示PGD2可促进GCSC凋亡(P<0.05).另外,Western blot结果显示,与空白组和DMSO组相比,PGD2组MMP-2、MMP-9、CD44、SALL4、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05).此外,与空白组和DMSO组相比,PGD2组磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的蛋白水平明显降低(P<0.05),而JAK2、STAT3蛋白水平无明显变化.结论 PGD2可能通过调控JAK2/STAT3通路抑制GCSC增殖、侵袭与干性,促进其凋亡.

胃癌干细胞;前列腺素D2;增殖;侵袭;凋亡;干性

汪非凡;王娜;高培垚;陈阿敏;黄岩;马丽;汪晶;许颖;张强

蚌埠医学院第一附属医院检验科,蚌埠 233004;蚌埠市中医医院;蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室

山西医科大学学报

[1]汪非凡;王娜;高培垚;陈阿敏;黄岩;马丽;汪晶;许颖;张强-.前列腺素D2对胃癌干细胞增殖、侵袭、凋亡及干性的影响)[J].山西医科大学学报,2022(10):1203-1211

GCSC,spalt

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