目的 探究多次传代对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化的影响,以及牙周炎症来源牙周膜干细胞成骨相关长链非编码RNA(osteogenesis impairment-related long noncoding RNAs of periodontal mesenchymal stem cells from periodontitis patients,lncRNA POIR)对多次传代后PDLSCs成骨分化功能的影响.方法 将PDLSCs细胞连续传代,取第3代、第15代、第30代细胞用于后续实验.碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性和茜素红染色检测不同代数PDLSCs成骨分化能力.实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同代数细胞lncRNA POIR表达水平.将第30代PDLSCs分为3组:空白对照组、无义序列转染对照组(转染sh-NC质粒)和lncRNA POIR下调组(转染sh-lncRNA POIR质粒).ALP染色、ALP活性和茜素红染色检测各组PDLSCs成骨分化能力.RT-PCR、Western blot检测各组PDLSCs中矮小相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)表达水平.采用生物信息学分析lncRNA POIR和微小RNA-214(miR-214)的结合位点.为进一步确定lncRNA POIR与miR-214之间调控关系,RT-PCR检测lncRNA POIR下调组与对照组PDLSCs中miR-214表达水平的差异,从而评价lncRNA POIR对miR-214的作用.结果 与第3代和第15代比较,第30代PDLSCs成骨结节形成量减少(P<0.05),ALP染色面积占比减少(P<0.01),ALP活性降低(P<0.01).与第3代和第15代比较,第30代PDLSCs中lncRNA POIR的表达水平下降(P<0.01).与空白对照组和无义序列转染对照组比较,lncRNA POIR下调组PDLSCs成骨结节形成减少(P<0.01),ALP染色面积占比减少(P<0.01),ALP活性降低(P<0.05).与空白对照组和无义序列转染对照组比较,lncRNA POIR下调组PDLSCs中Runx2、ALP、OCN表达水平降低(P<0.05).生物信息学分析结果显示lncRNA POIR与miR-214存在结合位点.与空白对照组和无义序列转染对照组比较,lncRNA POIR下调组miR-214的表达水平升高(P<0.01).结论 多次传代会损害PDLSCs的成骨分化功能,抑制lncRNA POIR表达.lncRNA POIR可以调控PDLSCs传代过程中的成骨分化功能.

牙周膜干细胞;长链非编码RNA;miR-214;成骨分化;多次传代

邵馨;王爽;宋扬;吴凡;王丽颖

西安交通大学口腔医院陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室,西安 710004;西安交通大学口腔医院正畸科;空军第九八六医院口腔科;空军第九八六医院心脏外科

山西医科大学学报

[1]邵馨;王爽;宋扬;吴凡;王丽颖-.长链非编码RNA POIR对多次传代后牙周膜干细胞成骨分化功能的影响)[J].山西医科大学学报,2022(06):731-737

POIR

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