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抗HER-2纳米抗体的筛选、表达及功能鉴定
文献摘要：
目的 筛选获取抗HER-2纳米抗体序列,偶联人IgG1 Fc片段,采用原核表达系统表达重组抗HER-2纳米抗体并验证其生物学特征.方法 基于天然噬菌体纳米抗体展示库,采用生物素-链霉亲和素液相筛选法,以生物素化HER-2抗原为靶点经三轮淘选,随机挑取单克隆进行ELISA鉴定并测序.获得抗HER-2纳米抗体序列,将其偶联人IgG1 Fc片段,并将重组抗HER-2纳米抗体序列克隆至原核表达载体pET-30a,转化至表达菌Arctic Express,诱导重组抗HER-2纳米抗体表达并纯化,采用SPR、Western blot、细胞免疫荧光对纯化后的重组抗HER-2纳米抗体特征和功能进行验证.结果 经淘选获得了一条抗HER-2纳米抗体序列,与人IgG1 Fc片段偶联,成功构建了原核表达载体,并表达纯化获得的重组抗HER-2纳米抗体;SPR显示其亲和力较好,Western blot表明其可与HER-2抗原结合,细胞免疫荧光实验结果提示其可与人乳腺癌细胞SKBR-3结合.结论 本实验获得了亲和力、特异性均良好且具有一定生物学功能的重组抗HER-2纳米抗体,可为其后续临床应用提供基础.
文献关键词：
纳米抗体;人表皮生长因子受体-2;噬菌体纳米抗体展示库
中图分类号：
作者姓名：
王丽燕;李艳宁;王红霞;蒋丹;张艳婷;张爱君;徐广贤
作者机构：
宁夏医科大学临床医学院,银川 750004;宁夏医科大学基础医学院,银川 750004;广东医科大学医学技术学院,广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室,广东医科大学检验医学研究所,东莞 523808
文献出处：
引用格式：
[1]王丽燕;李艳宁;王红霞;蒋丹;张艳婷;张爱君;徐广贤-.抗HER-2纳米抗体的筛选、表达及功能鉴定)[J].宁夏医科大学学报,2022(06):616-621,629
A类：
噬菌体纳米抗体展示库
B类：
HER,功能鉴定,偶联,IgG1,Fc,表达系统,生物学特征,生物素化,原为,三轮,淘选,单克隆,列克,原核表达载体,pET,30a,Arctic,Express,抗体表达,SPR,blot,细胞免疫,免疫荧光,表达纯化,亲和力,抗原结合,人乳腺癌细胞,SKBR,生物学功能,人表皮生长因子受体
AB值：
0.24441
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