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载脂蛋白E和巨噬细胞条件性PDHA1双基因敲除小鼠模型的构建和鉴定
文献摘要：
目的 构建并鉴定Cre-Loxp重组酶系统调控的PDHA1巨噬细胞条件性敲除小鼠和载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠杂交的双基因敲除小鼠模型.方法 利用Cre-LoxP重组酶系统理论,将PDHA 1f/w小鼠与Lyz2-Cre+小鼠进行F1代自然交配,子代产生的PDHA1f/w-Lyz2-Cre+小鼠进行F2代自然交配,产生F3代小鼠PDHA 1f/f-Lyz2-Cre+即为PDHA 1巨噬细胞条件性敲除小鼠模型,提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,以DNA水平判断小鼠基因型.取肝脏、脾脏组织利用q-PCR和Western blot技术检测PDHA1基因的敲除效果;将PDHA1f/f-Lyz2-Cre+与ApoE-/-小鼠杂交,经数代杂交筛选得到PDHA1巨噬细胞条件性和ApoE双基因敲除小鼠(PDHA1f/f-Lyz2-Cre+-ApoE-/-)和对照小鼠(PDHA1f/f-Lyz2-Cre--ApoE-/-)并进行基因型鉴定,取肝脏、脾脏组织利用q-PCR和Western blot技术检测巨噬细胞PDHA1基因和ApoE双基因的敲除效果.结果 实时定量PCR和免疫印迹结果均显示,PDHA1的mRNA水平下调、蛋白表达降低(P均<0.05).最终获得PDHA1巨噬细胞条件性敲除小鼠PDHA1f/f-Lyz2-Cre+以及PDHA1巨噬细胞条件性和ApoE双基因敲除小鼠(PDHA1f/f-Lyz2-Cre+-ApoE-/-),两种类型基因敲除小鼠出生符合孟德尔遗传规律,存活并可育.结论 本实验利用Cre-Loxp系统,成功构建并鉴定PDHA 1巨噬细胞条件性敲除小鼠和ApoE基因敲除小鼠杂交的双基因敲除小鼠模型,为研究PDHA1在动脉粥样硬化疾病发病机制中的作用提供实验动物.
文献关键词：
动脉粥样硬化;巨噬细胞;丙酮酸脱氢酶E1α;基因敲除技术;Cre-LoxP
中图分类号：
作者姓名：
刘耀阳;孙岳;刘太阳;郝玮;王秋实;刘志宏
作者机构：
宁夏医科大学公共卫生与管理学院,银川 750004
文献出处：
引用格式：
[1]刘耀阳;孙岳;刘太阳;郝玮;王秋实;刘志宏-.载脂蛋白E和巨噬细胞条件性PDHA1双基因敲除小鼠模型的构建和鉴定)[J].宁夏医科大学学报,2022(06):541-546
A类：
PDHA,PDHA1f
B类：
载脂蛋白,巨噬细胞,双基因敲除,基因敲除小鼠模型,Loxp,重组酶,酶系统,条件性敲除,ApoE,LoxP,系统理论,Lyz2,Cre+,自然交配,子代,F2,F3,即为,鼠尾,琼脂糖凝胶电泳,脾脏,blot,数代,选得,基因型鉴定,实时定量,免疫印迹,孟德尔遗传,遗传规律,动脉粥样硬化,疾病发病机制,实验动物,丙酮酸脱氢酶,E1,基因敲除技术
AB值：
0.145215
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