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小鼠肺炎病毒RT-PCR方法的建立及在实验动物感染和国际比对样本检测中的应用
文献摘要：
目的 建立小鼠肺炎病毒RT-PCR检测方法,用于实验动物及实验动物相关样本的检测.方法 选择小鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)G基因保守序列设计合成引物,建立RT-PCR方法,并进行方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性验证.应用建立的方法对日常送检的27只小鼠、9只大鼠、5只沙鼠肺组织样本和19只PVM感染小鼠肺组织样本,及8份国际实验动物理事会(the International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS)国际比对样本进行检测.结果 建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应.能够检测PVM DNA最小模板浓度为8.77×102拷贝/μL,可检测病毒最小滴度为10-4.0/mL.用放置-30℃冰箱保存12个月的引物和PVM质粒进行PCR检测,仍能扩增到约249 bp的目的条带.用建立的方法检测日常送检的27只小鼠、9只大鼠、5只沙鼠肺组织样本,结果均为阴性;检测19只PVM感染小鼠肺组织样本,有7只小鼠肺组织样本结果阳性;检测8份ICLAS国际比对样本,有1份样本小鼠肺炎病毒核酸阳性,均符合预期结果.结论 建立的PVM RT-PCR方法特异、敏感,重复性、稳定性好,能够用于小鼠、大鼠、沙鼠等实验动物的监测及其相关样本的检测.
文献关键词：
小鼠肺炎病毒;RT-PCR;实验动物;应用
中图分类号：
作者姓名：
王吉;王莎莎;王淑菁;李威;秦骁;李晓波;付瑞;岳秉飞;贺争鸣
作者机构：
中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心,北京 102629
文献出处：
引用格式：
[1]王吉;王莎莎;王淑菁;李威;秦骁;李晓波;付瑞;岳秉飞;贺争鸣-.小鼠肺炎病毒RT-PCR方法的建立及在实验动物感染和国际比对样本检测中的应用)[J].实验动物科学,2022(02):1-10
A类：
小鼠肺炎病毒,ICLAS
B类：
实验动物,物感,国际比对,pneumonia,virus,mice,PVM,保守序列,序列设计,设计合成,引物,送检,沙鼠,肺组织,理事会,International,Council,Laboratory,Animal,仙台病毒,呼肠孤病毒,汉坦病毒,胞脉,脉络丛,脑膜炎,交叉反应,拷贝,小滴,滴度,冰箱,质粒,扩增到,bp,条带,病毒核酸,预期结果,法特,够用
AB值：
0.33065
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