目的 探讨骨肉瘤干细胞差异表达microRNA(miRNA)及其对骨肉瘤干细胞的干性特性(自我更新、侵袭、凋亡)的影响.方法 采用无血清悬浮培养法和流式分选术分离鉴定骨肉瘤干细胞;分别采用成球实验、体外侵袭鉴定骨肉瘤干细胞的干性特性;高通量测序检测骨肉瘤干细胞中差异表达miRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达miRNA的情况,验证miRNA结果;相关miRNA抑制剂干扰后,分别进行成球实验和侵袭实验检测miRNA对骨肉瘤干细胞自我更新、侵袭能力和细胞凋亡的影响.结果 成功分离Saos-2的CD133+和CD133-细胞,具有较强的自我更新能力和侵袭能力.与CD133-细胞相比,CD133+细胞的高表达miRNAs共有15个;低表达miRNAs共有2个.采用qPCR技术验证高通量测序差异表达miRNA相关结果,CD133+亚群中miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091表达上调,miR-3143、miR-3150a-5p表达下调.抑制相关高表达miRNA(miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091)表达后,CD133+细胞的自我更新能力和侵袭均下降,细胞凋亡上升.结论 骨肉瘤干细胞中具有多种差异表达miRNA,其对骨肉瘤干细胞的干性特性具有调控作用.

骨肉瘤干细胞;CD133;自我更新;侵袭

100035 北京市创伤骨科研究所骨组织工程研究室/北京积水潭医院

[1]王芊;张博文;罗鹏;郭建勋;王宏刚;聂井君;王任先;陈大福-.骨肉瘤干细胞差异表达microRNA对其干性特性的影响)[J].中国医药生物技术,2022(03):214-219

3150a

骨肉瘤干细胞,差异表达,microRNA,干性,自我更新,无血清,悬浮培养,培养法,流式分选,分离鉴定,成球实验,外侵,逆转录,qRT,实验检测,侵袭能力,功分,Saos,CD133+,miRNAs,低表达,qPCR,技术验证,亚群,33b,3p,5p,种差

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