目的 验证质谱筛选的结果 ,确定对氧磷酶2 (PON2)是否为蛋白质精氨酸甲基转移酶 1 (PRMT1 )的底物蛋白.方法 用白细胞介素－4(IL－4)刺激A549细胞后,用免疫沉淀法捕获发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的蛋白,用梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析捕获的蛋白,通过银染显示差异性条带,质谱分析差异性条带中的蛋白种类.用免疫沉淀检验PON2 的甲基化修饰状态.检测PON2 和PRMT1 对IL－4表达的浓度依赖性和时间依赖性.用免疫共沉淀检测PON2 和PRMT1 的相互作用,并在MS203 抑制Ⅰ型PRMT后检测PON2的甲基化修饰水平的变化.诱导小鼠哮喘模型,检测PON2表达的组织细胞类型,以及肺组织中PON2和PRMT1 的表达水平.结果 (1 )质谱分析显示在IL－4处理的A549细胞中检出31 1 个差异显示的蛋白,PON2为其中之一.(2)免疫沉淀显示,IL－4可促进A549细胞中PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰,但IL－4刺激对PON2的表达水平无影响.(3)PON2与PRMT1 有相互作用,IL－4可促进PON2与PRMT1 结合,抑制Ⅰ型PRMT活性可以削弱IL－4对PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的促进作用.(4)PON2主要在小鼠气道上皮表达,且PON2的表达水平在对照组与哮喘组组织间差异无统计学意义(P＞0. 05).结论 PON2为PRMT1 的底物蛋白.IL－4可以促进PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰.

肺上皮细胞;IL-4;蛋白质精氨酸甲基转移酶1;对氧磷酶2;甲基化修饰

杨万勇;马丽;任家骏;杨旭东

东莞市水乡中心医院检验科 广东东莞 523130;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系 陕西西安710061

广东医学

[1]杨万勇;马丽;任家骏;杨旭东-.白细胞介素－4通过上调蛋白质精氨酸甲基转移酶1的表达水平引起对氧磷酶2的精氨酸甲基化修饰)[J].广东医学,2022(04):434-440

MS203

蛋白质精氨酸甲基转移酶,对氧磷酶,甲基化修饰,PON2,PRMT1,底物,A549,免疫沉淀法,非对称性,二甲基,聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳分析,银染,条带,质谱分析,白种,浓度依赖性,时间依赖性,免疫共沉淀,哮喘模型,组织细胞,细胞类型,肺组织,气道上皮,组组,肺上皮细胞

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