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利用酵母双杂交系统筛选NKD1结合蛋白质
文献摘要：
目的:酵母双杂交技术筛选结肠癌细胞中与裸角质层同源蛋白1(naked cuticle homolog 1,NKD1)相互结合的蛋白质,从而进一步了解NKD1.方法:以结肠癌细胞SW480的cDNA为模板,克隆NKD1基因,并将其成功构建在pGBKT7诱饵载体上.利用酵母双杂交技术从结肠癌SW480细胞文库进行筛选.结果:初步筛选获得13个阳性克隆菌株.经测序,在数据库中BLAST比对后,共确定为8种不同基因编码的蛋白片段.回转实验进一步验证了这8种不同基因编码的蛋白均能够激活酵母双杂交系统中的His3、Ade2和LacZ报告基因.这8种不同基因中的4种基因编码的蛋白片段为YWHA蛋白家族成员,其中2种都是编码YWHAE蛋白片段.在结肠癌HCT116细胞中通过免疫共沉淀实验进一步验证,NKD1与YWHAE在结肠癌细胞中可以相互结合.结论:结肠癌细胞中,证实YWHAE是NKD1结合蛋白质,通过调控胰岛素的敏感性,进而调控结肠癌细胞对葡萄糖的摄入.
文献关键词：
结肠癌;酵母双杂交;肿瘤标志物;裸角质层同源蛋白1;免疫共沉淀
中图分类号：
作者姓名：
刘迁;于华裔;沈颖;王婉怡;王林林;韩晓东
作者机构：
江苏大学附属武进医院/徐州医科大学临床学院,江苏 常州 213017;内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古 呼和浩特 010018
文献出处：
引用格式：
[1]刘迁;于华裔;沈颖;王婉怡;王林林;韩晓东-.利用酵母双杂交系统筛选NKD1结合蛋白质)[J].现代肿瘤医学,2022(05):757-762
A类：
Ade2
B类：
酵母双杂交系统,NKD1,结合蛋白,酵母双杂交技术,技术筛选,结肠癌细胞,角质层,同源蛋白,naked,cuticle,homolog,相互结合,SW480,cDNA,建在,pGBKT7,诱饵载体,文库,初步筛选,BLAST,基因编码,回转,活酵母,His3,LacZ,报告基因,白家,种都,YWHAE,HCT116,免疫共沉淀,摄入,肿瘤标志物
AB值：
0.269374
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