目的:探讨在靶向HER2的CAR的CD3ζ链胞内区引入YRHQ基序对CAR-T细胞的特异性杀伤活性及免疫记忆形成的影响.方法:通过DNA合成获得包含靶向HER2的编码抗原受体H28ζ或H28ζ(YRHQ)的DNA片段,通过慢病毒载体将不同CAR的DNA片段分别转导健康人外周血T细胞,制备靶向HER2的H28ζ-CAR-T及H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞.扩增过程中对不同CAR-T细胞进行计数,FCM检测CAR的表达率.将CAR-T细胞分别与HER2阳性的SKOV3、MDA-MB-453或HER2阴性的MCF-7细胞共培养,LDH释放法检测其杀伤活性,ELISA法检测IL-2、IFN-γ和颗粒酶B的水平,WB法检测STAT3磷酸化水平及免疫检查点分子TIM-3和PD-1的表达,通过FCM检测CCR7、CD45RO的表达,分析CAR-T细胞的表型.结果:H28ζ-CAR-T和H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞扩增能力较好,体外培养7 d时扩增4～5倍.H28ζ-CAR和H28ζ(YRHQ)-CAR表达率分别为(33.3±2.85)％和(28.30±3.2)％.H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的杀伤活性较H28ζ-CAR-T细胞更高(P<0.05).经HER2抗原刺激后,与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较,H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的STAT3磷酸化水平较H28ξ-CAR-T细胞明显升高(P<0.01);而两者间PD-1和TIM-3的表达无明显差异.未经抗原刺激的CAR-T细胞CCR7和CD45RO表达与正常T细胞比较差异无统计学意义(均P>0.05),与SKOV3细胞共培养后,与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较,H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞中TEM细胞比例明显增加、TCM细胞比例明显减少(均P<0.05).结论:在CD3胞内区引入YRHQ基序可在一定程度上提高CAR-T细胞的杀伤潜力.

人表皮生长因子受体2;CAR-T细胞;YRHQ基序;STAT3;记忆性T细胞

河北医科大学 免疫学教研室 河北省重大疾病免疫机制及干预重点实验室,河北 石家庄 050017

[1]王田;张征峥;王晓峰;张紫梦;张雨晴;马翠卿;宋淑霞-.CD3ζ链引入YRHQ基序可增强靶向HER2的CAR-T细胞的抗肿瘤活性)[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2022(03):181-188

YRHQ,H28z

CD3,基序,HER2,CAR,抗肿瘤活性,内区,特异性杀伤,杀伤活性,免疫记忆,抗原受体,过慢,慢病毒载体,转导,健康人,人外周血,FCM,SKOV3,MB,MCF,细胞共培养,LDH,IFN,颗粒酶,WB,STAT3,磷酸化,免疫检查点,TIM,CCR7,CD45RO,细胞扩增,增能,体外培养,抗原刺激,TEM,TCM,人表皮生长因子受体,记忆性

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