目的 探讨鹰嘴豆芽异黄酮(isoflavones extracted from chickpea sprouts,ICS)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响及机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度ICS(0、0.1、0.5、1、5、10、50、100 mg/L)对MC3T3-E1细胞在24、48、72 h的增殖作用.成骨诱导培养基中加入不同浓度ICS(0、0.5、1、5 mg/L)观察其对成骨分化不同指标的影响:诱导第7天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatease,ALP)染色观察酶活性;第21天进行茜素红染色观察钙沉积;RT-qPCR检测诱导7 d各组Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)和1型胶原蛋白(collagen-1,COL1)mRNA表达水平;通过Western Blot检测诱导7 d RUNX2和COL1的表达水平,同时加入雌激素受体(estrogen receptor,ER)抑制剂ICI 182,780(1 μmol/L),检测对成骨分化相关蛋白RUNX2和COL1蛋白表达的影响.结果 ICS在0～10 mg/L浓度范围促进了细胞的增殖(P＜0.05),当浓度大于10 mg/L时对细胞有毒性作用(P＜0.05);与对照组(0 mg/L)比较,ICS浓度为0.5、1、5 mg/L均能促进ALP活性,具有显著差异,且具有剂量依赖性;诱导21 d后茜素红染色结果显示,ICS能够促进钙沉积,随剂量升高钙结节数量明显增多,具有统计学差异;ICS能够上调成骨分化相关基因RUNX2、OCN和COL1的mRNA转录水平(P＜0.05),促进成骨分化相关蛋白COL1、RUNX2的表达(P＜0.05);雌激素受体抑制剂ICI 182,780抑制ICS对成骨分化相关蛋白COL1、RUNX2的表达(P＜0.05).结论 ICS能够促进小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1的增殖,并通过上调成骨分化相关基因及蛋白的表达,诱导MC3T3-E1细胞的成骨分化,雌激素受体抑制剂ICI 182,780 能够抑制ICS的成骨诱导分化作用,推测ICS是通过ER相关通路实现促进成骨分化作用的.

鹰嘴豆芽异黄酮;MC3T3-E1细胞;成骨分化

黄金勇;吐尔逊江·达地汗;郑靖杰;高彦华;陈艳阳;王茜;王鑫;谢增如;马海蓉

新疆医科大学第一附属医院,新疆 乌鲁木齐830054;中国科学院新疆理化技术研究所,新疆 乌鲁木齐830011

中国骨质疏松杂志

[1]黄金勇;吐尔逊江·达地汗;郑靖杰;高彦华;陈艳阳;王茜;王鑫;谢增如;马海蓉-.鹰嘴豆芽异黄酮对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖及分化的研究)[J].中国骨质疏松杂志,2022(12):1723-1727,1734

鹰嘴豆芽异黄酮,phosphatease

小鼠成骨前体细胞,MC3T3,E1,isoflavones,extracted,from,chickpea,sprouts,ICS,CCK,增殖作用,诱导培养基,成骨分化,同指,碱性磷酸酶,alkaline,ALP,茜素红,qPCR,Runt,runt,related,transcription,RUNX2,骨钙素,osteocalcin,OCN,胶原蛋白,collagen,COL1,Blot,雌激素受体,estrogen,receptor,ER,ICI,细胞的增殖,有毒,毒性作用,剂量依赖,量依赖性,染色结果,高钙,节数,统计学差异,调成,转录水平,促进成骨,成骨诱导分化,相关通路

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