β-葡萄糖苷酶是木质纤维素生物降解途径的关键酶,广泛应用于纤维素酶制剂中以提高底物的转化效率.为了挖掘和开发新型β-葡萄糖苷酶,从生孢噬纤维菌CX11基因组中克隆了 4个β-葡萄糖苷酶基因Sm_0268、Sm_0864、Sm_3000和Sm_5379,并在大肠杆菌中进行异源表达.重组蛋白Sm_0268、Sm_0864、Sm_3000 和 Sm_5379 分子质量分别为 81.7、108.4、83.5 和 82.1 ku,酶活力分别为(24.2士0.4)U/g、(125.9±0.6)U/g、(32.4±0.6)U/g 和(76.1±0.5)U/g.Sm_0268、Sm_3000 和 Sm_5379 的最适反应温度为50℃,Sm_0864的最适反应温度为45℃.Sm_3000在温度达到60℃时仍能保留40％的活性,具有一定的高温催化能力.Sm_0268、Sm_0864和Sm_3000的最适反应pH为7.5,Sm_5379的最适反应pH为7.0,Sm_0864和Sm_3000具有一定的碱耐受性.利用实时荧光定量PCR对编码基因在不同碳源培养条件下的相对表达水平进行分析,结果表明,在以纤维二糖为唯一碳源培养菌株CX11时,4个β-葡萄糖苷酶基因的表达水平均上调,推测它们均不同程度参与CX11降解纤维素的过程.

β-葡萄糖苷酶;生孢噬纤维菌;异源表达;酶学性质

大连工业大学 生物工程学院,辽宁 大连 116034

[1]赵鑫;费嵩禹;宋祥和;陈晓艺-.生孢噬纤维菌β-葡萄糖苷酶的异源表达与酶学性质表征)[J].大连工业大学学报,2022(05):332-338

生孢噬纤维菌,CX11

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