典型文献
α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立
文献摘要：
目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A?(GLA)?基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞?(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料.方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal?A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal?A的催化残基位置.通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体.将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定.结果 人/猪α-Gal?A的氨基酸序列一致性为81％,相似性为89％;?三维结构的均方根偏差值为0.012.猪α-Gal?A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸.成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型.结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal?A具有高度的相似性.利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础.
文献关键词：
Fabry病;α-半乳糖苷酶A基因;α-半乳糖苷酶A;CRISPR/Cas9;猪胎儿成纤维细胞
中图分类号：
作者姓名：
冷允俊;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡
作者机构：
南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,南京 211166
文献出处：
引用格式：
[1]冷允俊;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡-.α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立)[J].中国医科大学学报,2022(08):688-694
A类：
B类：
半乳糖,糖苷酶,基因敲除,猪胎儿成纤维细胞,细胞系,CRISPR,Cas9,技术构建,GLA,巴马,马公,公猪,PFFs,Fabry,病猪,实验材料,利用生物,生物信息学方法,基因编码,Gal,残基,在编,外显子,子区,单链,向导,打靶,质粒,共转染,G418,药物筛选,单克隆细胞,氨基酸序列,序列一致性,三维结构,均方根偏差,偏差值,天冬氨酸,基因型,方法验证,技术获得
AB值：
0.324045
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