目的 探究微量元素铜对肝癌HepG2细胞自噬水平的影响,解析铜离子诱导肝癌自噬的分子机制.方法 0、10、50、100和200μmol/L硫酸铜(CuSO4)处理HepG2细胞24 h,100μmol/L CuSO4处理HepG2细胞0、4、8、12、24 h后检测自噬相关蛋白表达,蛋白质印迹法检测HepG2细胞内自噬分子标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62,以及线粒体自噬标志分子Parkin表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LC3Ⅱ和p62 mRNA表达,细胞计数试剂盒检测细胞活力.RFP-GFP荧光双标LC3慢病毒系统感染HepG2细胞,CuSO4处理表达RFP-GFP-LC3B的HepG2细胞,共聚焦检测自噬流变化.结果 10、50、100、200μmol/L CuSO4作用HepG2细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值呈剂量(F=6519.000,P<0.001)和时间依赖性升高(F=934.300,P<0.001);p62蛋白表达呈剂量(F=55564.000,P<0.001)和时间依赖性降低(F=11413.000,P<0.001).共聚焦结果显示铜离子蓄积诱导HepG2细胞内自噬小体数目(t=30.040,P<0.001)及自噬溶酶体数目(t=272.000,P<0.001)均增加.100μmol/L CuSO4引起HepG2细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(t=103.600,P<0.001);p62蛋白表达下降(t=146.600,P<0.001),EBSS也引起p62蛋白表达下降(t=146.000,P<0.001);而对Parkin蛋白表达没有影响.100μmol/L CuSO4作用HepG2细胞24 h后LC3ⅡmRNA表达上调,而EBSS饥饿处理则不影响LC3ⅡmRNA表达,F=302.400,P<0.001;p62 mRNA表达均一定程度上调,F=61.750,P<0.001.细胞计数实验结果表明100μmol/L CuSO4和EBSS饥饿均使细胞活力降低,F=111.700,P<0.001.结论 高铜能够通过转录水平上调LC3Ⅱ分子mRNA表达诱导肝癌HepG2细胞内自噬增强.

肝癌;铜稳态;LC3;自噬;p62

张萌;石萌;南欣睿;张杰;杜文倩;李超;刘宝琴

中国医科大学生命科学学院,辽宁 沈阳 110122

中华肿瘤防治杂志

[1]张萌;石萌;南欣睿;张杰;杜文倩;李超;刘宝琴-.高铜通过转录水平上调LC3表达诱导肝癌HepG2细胞自噬的研究)[J].中华肿瘤防治杂志,2022(24):1734-1740

高铜,转录水平,肝癌,HepG2,细胞自噬,微量元素,析铜,铜离子,硫酸铜,CuSO4,自噬相关蛋白,蛋白质印迹法,分子标志物,p62,线粒体自噬,Parkin,qRT,试剂盒,细胞活力,RFP,GFP,慢病毒,处理表,LC3B,共聚,自噬流,时间依赖性,蓄积,自噬小体,自噬溶酶体,EBSS,饥饿,理则,均一,铜稳态

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