[目的]建立雄性二倍体毛白杨再生体系,构建稳定的遗传转化方法,为进一步研究毛白杨基因功能提供试验平台.[方法]以雄性二倍体毛白杨的幼嫩茎段和叶片为外植体,1/2 MS为基本培养基,通过调整6-BA、IAA和TDZ激素浓度进行再生体系筛选;采用农杆菌EHA105介导叶盘法,控制预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和卡那霉素筛选浓度,进行遗传转化;以幼嫩叶片原生质体为受体细胞,PEG介导转化荧光标记基因EGFP,进行瞬时表达.[结果]雄性二倍体毛白杨再生过程包括继代、芽伸长和生根3个阶段,其培养基组分分别为 1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ、1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA 和 1/2 MS+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,该条件下生根率为96.7％,增殖系数为4.47.遗传转化过程包括预培养、农杆菌侵染、共培养、抗性筛选和生根5个阶段,其中预培养为12 h、农杆菌浓度OD600为0.4、侵染时间为20 min、共培养时间为24 h、卡那霉素(30 mg/L)筛选45 d和抗性苗生根20 d.试验共获得86株抗性植株,其中14株分子鉴定结果为阳性.在40％PEG4000的介导下,EGFP基因瞬间转化效率为50％.[结论]雄性二倍体毛白杨再生周期短、遗传转化稳定,是杨树基础研究的理想材料.本研究拓宽了杨树遗传转化体系,为杨树分子辅助育种提供了新途径.

二倍体毛白杨;再生体系;遗传转化;瞬时表达

俞子承;凌聪;陈赢男;李淑娴;尹佟明;李小平

南京林业大学林学院,南方现代林业协同创新中心,江苏 南京 210037

南京林业大学学报（自然科学版）

[1]俞子承;凌聪;陈赢男;李淑娴;尹佟明;李小平-.雄性二倍体毛白杨再生体系的构建和遗传转化的研究)[J].南京林业大学学报（自然科学版）,2022(01):187-196

二倍体毛白杨

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