典型文献
小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化
文献摘要：
为实现小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶(non-specific nuclease from Yersinia enterocolitica subsp.palearctica,Nucyep)的高水平分泌表达,研究从pET24a-nucyep中得到nucyep基因片段,插入穿梭质粒pBE-S得到重组载体pBE-S-nucyep,将其线性化后与枯草芽孢杆菌信号肽混合物连接并转化大肠杆菌感受态细胞,经测序验证共获得43个含正确信号肽序列的克隆.将以上重组载体分别转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)RIK1285,通过比光密度法筛选得到Nucyep分泌水平最高的工程菌株B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW.对其进行培养条件优化,结果表明,采用工程菌B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW在培养基3×LB中以体积分数5％接种量接种,培养温度30℃,摇床220 r/min振荡培养48 h时,发酵上清液中重组Nucyep酶活达到(8.27±0.41)U/μL,较优化前提高了约20倍.结果表明,通过对信号肽的筛选及培养条件的优化,重组Nucyep在B.subtilis中可获得高效分泌表达,为其进一步研究及应用奠定基础.
文献关键词：
小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶;分泌表达;枯草芽孢杆菌;培养优化;活性测定
中图分类号：
作者姓名：
朱瑜;郭森林;高婷;王辂;李端华;李进军;葛燕;赵晨
作者机构：
成都大学 药学院 四川抗菌素工业研究所,成都 610106
文献出处：
引用格式：
[1]朱瑜;郭森林;高婷;王辂;李端华;李进军;葛燕;赵晨-.小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化)[J].生物学杂志,2022(06):52-58
A类：
小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶,enterocolitica,palearctica,Nucyep,nucyep,pBE,YoaW
B类：
培养条件优化,specific,nuclease,from,Yersinia,subsp,分泌表达,pET24a,穿梭,质粒,重组载体,线性化,枯草芽孢杆菌,信号肽,混合物,大肠杆菌,感受态,共获,确信,肽序列,Bacillus,subtilis,RIK1285,光密度,选得,泌水,工程菌株,LB,接种量,培养温度,摇床,发酵上清液,研究及应用,培养优化,活性测定
AB值：
0.215161
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