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TNF-α诱导大鼠软骨细胞焦亡模型的建立与评价
文献摘要：
目的 建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞焦亡模型并评价模型的特点.方法 两步酶消化法获取大鼠膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察大鼠软骨细胞的形态结构,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色鉴定大鼠软骨细胞,用不同质量浓度TNF-α(5、10、20、40 ng/ml)诱导建立大鼠软骨细胞的焦亡模型,以TNF-α(0 ng/ml)为对照组.CCK-8法检测大鼠软骨细胞活力,West-ern blot检测大鼠软骨细胞焦亡信号相关蛋白,确定最佳刺激浓度,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-18的水平,免疫荧光检测大鼠软骨细胞gasdermin D(GSDMD)表达,扫描电镜观测大鼠软骨细胞焦亡的形态学改变.结果 与对照组相比,大鼠软骨细胞的活力随着TNF-α浓度升高而逐渐下降,并且核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶1(caspase-1)、GSDMD、磷酸化核转录因子-κB p65(P-p65)蛋白的表达增加.TNF-α(20 ng/ml)可诱导大鼠软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达上调,ColⅡ表达减少,GSDMD荧光表达增强,培养上清液中IL-1β、IL-18水平增加,关节软骨细胞肿胀,显微结构破坏.结论 成功建立大鼠软骨细胞焦亡模型.TNF-α(20 ng/ml)体外可致大鼠软骨细胞肿胀死亡,显微结构破坏,软骨基质降解,焦亡信号活化.
文献关键词：
TNF-α;骨关节炎;软骨细胞;焦亡
中图分类号：
作者姓名：
徐靓;吴玉娇;袁晓阳;张峰;程刚;张运芳;魏伟;严尚学
作者机构：
安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,抗炎免疫药物安徽省工程技术研究中心,合肥 230032
文献出处：
引用格式：
[1]徐靓;吴玉娇;袁晓阳;张峰;程刚;张运芳;魏伟;严尚学-.TNF-α诱导大鼠软骨细胞焦亡模型的建立与评价)[J].安徽医科大学学报,2022(05):781-786
A类：
B类：
软骨细胞焦亡,建立与评价,两步,酶消化法,膝关节软骨,关节软骨细胞,倒置,相差显微镜,形态结构,甲苯胺蓝染色,Col,免疫组化染色,ml,CCK,细胞活力,West,ern,blot,细胞培养,养上,上清液,免疫荧光检测,gasdermin,GSDMD,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白,NLRP3,半胱天冬酶,caspase,磷酸化,核转录因子,p65,基质金属蛋白酶,MMP,光表,显微结构,结构破坏,软骨基质,骨关节炎
AB值：
0.205493
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