为探究2019年山东省烟台市某大菱鲆Scophthalmus maximus养殖场出现的以腹水、体表及内脏出血为主要症状的疾病发病原因,通过平板划线法从患病濒死大菱鲆(体质量为 350 g±5 g)肝、肾、脾和心等组织中分离获得1 株优势菌,采用形态学观察,16S rRNA、gyrB基因和rpoB基因序列分析,PCR特异性引物扩增,以及人工回归感染试验等方法对优势菌进行鉴定,检测其毒力基因、耐药基因携带情况,并采用纸片扩增法(K-B)检测分离株对 10 类 23 种抗生素的敏感性.结果表明:从患病鱼分离获得的菌株,生理生化特征为革兰氏阴性杆菌,赖氨酸、鸟氨酸和葡萄糖产酸等试验呈阳性,枸橼酸、精氨酸、蔗糖、甘露醇、苦杏仁苷、尿素、硝酸盐还原和氧化酶等试验呈阴性;经16S rRNA、gyrB基因、rpoB基因序列比对,以及爱德华氏菌特异性引物扩增等鉴定,确定其为杀鱼爱德华氏菌Edwardsiella piscicida;该菌的毒力基因型为fimA+-fimB+-fimC+-fimD+-esrB+-mukF+-katB+-sodB+-citC+-gadB+,耐药基因型为 TEM+-ant(3″)-Ⅰ+-tet(A)+-mcr-1+-Sul2+-Sul3--oqxA-;将分离菌株制备成7.8×1010、7.8×109、7.8×108、7.8×107 CFU/mL 4 个浓度的菌悬液,腹腔注射健康大菱鲆,得到菌株对受试鱼的半致死浓度(LD50)为 1.2×108 CFU/mL;药敏试验显示,该菌株对磺胺类 2 种、多肽类 2 种和利福霉素类 1 种在内的 5 种抗生素类药物耐药;对β-内酰胺类 5 种、氨基糖苷类 3 种、喹诺酮类 5 种、大环内酯类 1 种、氯霉素类 1 种、四环素类 2 种和呋喃类1 种在内的 18 种抗生素敏感.研究表明,本试验首次从大菱鲆上检出携带 5 种耐药基因的杀鱼爱德华氏菌,本研究结果为鱼源耐药性杀鱼爱德华氏菌的分子特性、致病机理和药物防治等研究提供了科学参考.

大菱鲆;杀鱼爱德华氏菌;分离鉴定;毒力基因;耐药基因

烟台市海洋经济研究院, 山东 烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院 山东省海洋生态修复重点实验室, 山东 烟台264006

[1]黄华;于广磊;王力勇;高雁;张岚;孙佰鸣;庄焱文;王鹤-.大菱鲆源杀鱼爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力和耐药基因检测分析)[J].大连海洋大学学报,2022(06):922-932

fimA+,fimB+,fimC+,fimD+,esrB+,mukF+,katB+,sodB+,citC+,gadB+,TEM+,Sul2+

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