目的:溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种肠道慢性、易复发的非特异性炎症,肠上皮修复障碍是其重要的生物学特点,促进肠上皮愈合达到内镜下黏膜愈合是UC的最终治疗目标.Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)是影响器官发育、组织生长及肿瘤发生的重要辅助转录因子,近年来越来越多的研究关注YAP在肠黏膜修复中的作用,这对于靶向治疗UC及预防相关并发症的发生具有重要意义.本研究探究YAP调控肠黏膜上皮细胞增殖、修复及肠炎相关肿瘤(colitis associated cancer,CAC)发生的分子机制.方法:使用3％葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)连续诱导5 d构建小鼠急性肠炎模型.构建YAP过表达(YAPWT)及阴性对照(NC)的慢病毒载体,分别腹腔注射入DSS小鼠体内,于DSS诱导5 d及撤除DSS后正常饮水的5 d(5+5 d)脊椎脱臼处死小鼠,取结肠测量其长度,选择近肛管1～2 cm肠管行免疫组织化学、蛋白质印迹法分析.构建YAP过表达的肠上皮细胞系及信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)小干扰RNA(si-STAT3),用蛋白质印迹法探究YAP对STAT3的调控方式;用功能学细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕实验研究YAP调控STAT3在肠上皮细胞增殖中的作用;通过蛋白质免疫共沉淀探究YAP与STAT3的相互作用.结果:DSS炎症诱导导致YAP在肠上皮细胞中表达显著降低,相对于NC小鼠,过表达YAP促进了小鼠在DSS炎症损伤后肠黏膜的修复,表现为肠上皮的结构更为完整,黏膜中炎性细胞的数量减少.蛋白质印迹法、功能学实验及免疫共沉淀结果表明:细胞核中的YAP在DSS撤除后的2 h显著高表达,同时伴随STAT3及磷酸化STAT3(phosphorylated-STAT3,p-STAT3)高表达;YAP过表达上调STAT3、p-STAT3及其转录靶基因细胞-骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达,且促进肠上皮细胞的增殖及伤口"愈合".然而,在过表达YAP的基础上沉默STAT3则c-Myc及Cyclin D1表达降低,细胞增殖能力被逆转.蛋白质免疫共沉淀结果表明YAP和STAT3可以在细胞核内直接结合,促进STAT3的转录表达.在CAC发生过程中,过表达YAP细胞质磷酸化突变体下调STAT3的表达,抑制CAC的发生.结论:YAP通过激活STAT3调控肠上皮细胞增殖,促进DSS急性炎症小鼠的肠黏膜修复,YAP可作为UC肠黏膜修复的重要治疗靶点.然而,长期、过度的YAP激活可导致CAC的发生.

葡聚糖硫酸钠盐肠炎;黏膜修复;Yes相关蛋白;信号转导与转录激活因子3;肠炎相关肿瘤

夏翩翩;邓飞鸿

中南大学湘雅二医院消化内科,中南大学消化病研究中心,长沙 410011

中南大学学报（医学版）

[1]夏翩翩;邓飞鸿-.YAP蛋白通过激活STAT3调控肠上皮细胞增殖在DSS诱导肠炎及相关肠癌中的作用)[J].中南大学学报（医学版）,2022(12):1637-1645

肠炎相关肿瘤,YAPWT,葡聚糖硫酸钠盐肠炎

STAT3,肠上皮细胞,DSS,肠癌,溃疡性结肠炎,ulcerative,colitis,UC,非特异性炎症,修复障碍,生物学特点,内镜下,黏膜愈合,治疗目标,Yes,associated,protein,响器,器官发育,组织生长,肿瘤发生,黏膜修复,靶向治疗,相关并发症,肠黏膜上皮,cancer,CAC,dextran,sulfate,sodium,salt,急性肠炎,肠炎模型,过表达,NC,慢病毒载体,腹腔注射,射入,撤除,常饮,饮水,5+5,脊椎,脱臼,处死,肛管,肠管,免疫组织化学,蛋白质印迹法,细胞系,信号转导,转录激活因子,signal,transducer,activator,transcription,小干扰,调控方式,试剂盒,counting,kit,CCK,划痕实验,免疫共沉淀,炎症损伤,后肠,炎性细胞,细胞核,磷酸化,phosphorylated,靶基因,骨髓细胞,癌基因,cellular,myelocytomatosis,viral,oncogene,Myc,G1,特异性周期蛋白,D1,cycle,Cyclin,细胞的增殖,伤口,细胞增殖能力,转录表达,细胞质,突变体,急性炎症,治疗靶点

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