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shRNA干扰Keap1对缺氧肝细胞功能的影响
文献摘要：
目的 探讨短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰肝细胞内氧化应激感受器Keap1下调后对缺氧肝细胞功能的影响.方法 构建4条Keap1 shRNA(Plvx/GFP/puro-Keap1-1781、1894、1934、2097)和1条阴性对照shNC质粒序列,并筛选干扰效率最高的序列转染至小鼠肝细胞AML12中,采用Western blot技术检测不同缺氧处理时间Keap1以及其效应分子Nrf2蛋白水平,并通过测定Ⅲ型胶原α1(COL3A1)、TGF-β1、VEGF-A和IGF-1的表达了解其对促纤维化分子的影响.应用ELISA法测定上清中COL3A1的含量;运用WST-1检测缺氧肝细胞的活性;采用丙酮酸激酶(PK)活性及ATP含量测定判断缺氧肝细胞能量代谢状态.结果 转染Plvx/GFP/puro-Keap1-1781、1894、1934、2097后,Keap1 mRNA相对表达量分别为0.38±0.16、0.42±0.14、0.62±0.17、0.50±0.13,Plvx/GFP/puro-Keap1-1781质粒序列干扰效率最高,应用其转染至缺氧肝细胞AML12后,Keap1蛋白水平明显下降(P<0.05),Nrf2表达上升(P<0.05).与对照组相比,COL3A1、TGF-β1、VEGF-A和IGF-1蛋白表达受到抑制,且ELISA检测显示COL3A1分泌量减少(P=0.002).Keap1 shRNA干扰后,与对照组相比,缺氧肝细胞的活性上升(12 h:P=0.048;24 h:P=0.045;48 h:P=0.032),PK活性(P=0.045)和ATP含量升高(P=0.041).结论 转染Keap1 shRNA可降低缺氧肝细胞中促纤维化分子的表达,减少缺氧对肝细胞的损伤,为临床防治肝纤维化提供新的靶点.
文献关键词：
肝纤维化;肝细胞;Keap1;Nrf2
中图分类号：
作者姓名：
刘静
作者机构：
郑州大学第一附属医院病理科,郑州 450052
文献出处：
引用格式：
[1]刘静-.shRNA干扰Keap1对缺氧肝细胞功能的影响)[J].临床与实验病理学杂志,2022(09):1025-1029
A类：
Plvx
B类：
shRNA,Keap1,肝细胞,细胞功能,短发,发夹,small,hairpin,内氧化,应激感受,感受器,GFP,puro,shNC,质粒,转染,AML12,blot,处理时间,效应分子,Nrf2,COL3A1,TGF,VEGF,IGF,促纤维化,上清,WST,丙酮酸激酶,PK,ATP,含量测定,细胞能量代谢,代谢状态,相对表达量,分泌量,临床防治,肝纤维化
AB值：
0.299097
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