目的:制备 99Tc m－联肼尼克酰胺(HYNIC)－αCD8/Fab( 99Tc m－αCD8/Fab)探针，并探讨其用于SPECT/CT显像以预测抗程序性细胞死亡蛋白－1(PD－1)免疫治疗疗效的价值。 方法:合成前体HYNIC－αCD8/Fab和IRDye800－αCD8/Fab(Dye－αCD8/Fab)；以SnCl 2为还原剂，进行 99Tc m与前体HYNIC－αCD8/Fab的标记反应，制备 99Tc m－αCD8/Fab探针，分析其标记率、放化纯及稳定性，并探究其与体外淋巴细胞结合的特异性。建立BALB/c小鼠CT26结直肠肿瘤模型，通过SPECT/CT显像分析 99Tc m－αCD8/Fab的体内特异性结合能力；对荷瘤小鼠行抗PD－1治疗，然后行近红外荧光成像及SPECT/CT显像，检测肿瘤CD8 + T细胞浸润状况，并用HE染色和免疫荧光检测验证；经抗PD－1治疗后的荷瘤小鼠尾静脉给予抗CD8抗体，分析其损耗抗PD－1治疗疗效的情况。采用双因素方差分析进行组间差异比较。 结果:99Tc m－αCD8/Fab的标记率为90%，放化纯为95%，于PBS和胎牛血清(FBS)中放置720 min，放化纯仍达80%以上，稳定性良好；细胞结合实验显示， 99Tc m－αCD8/Fab与小鼠脾CD8 + T细胞受体和人外周血CD8 + T细胞受体结合值分别为(10.30±0.81)和(1.78±0.61)百分加入放射性剂量(%AD)/10 6个细胞，过量冷αCD8抗体可导致结合值降低至(1.59±0.25) %AD/10 6个细胞( F＝10.07， P<0.001)。SPECT/CT显像示， 99Tc m－αCD8/Fab在小鼠CT26结直肠肿瘤模型中具有良好的肿瘤摄取。近红外荧光成像示，对抗PD－1免疫治疗响应组小鼠肿瘤荧光强度为(8.9±1.1)%，明显高于非响应组的(7.1±0.8)%( F＝4.69， P＝0.024)，SPECT/CT显像同样显示响应组肿瘤摄取较高；HE和免疫荧光结果表明，响应组肿瘤和淋巴结组织中淋巴细胞浸润比例明显高于非响应组。此外，CD8 + T细胞损耗显著削弱了抗PD－1治疗疗效。 结论:成功制备了 99Tc m－αCD8/Fab，该探针能对肿瘤浸润CD8 + T细胞清晰显像；CD8靶向SPECT显像对临床预测和评估免疫治疗疗效具有潜在的应用价值。

结直肠肿瘤;淋巴细胞，肿瘤浸润;CD8阳性T淋巴细胞;程序性细胞死亡受体1;放射性核素显像;治疗结果;预测;小鼠

黎奎;高立权;杨秀杰;宋瑞;赵慧云;刘昭飞

北京大学基础医学院放射医学系医学同位素研究中心，北京　100191;北京大学医药卫生分析中心，北京　100191

中华核医学与分子影像杂志

[1]黎奎;高立权;杨秀杰;宋瑞;赵慧云;刘昭飞-.肿瘤浸润CD8 + T细胞SPECT/CT显像预测抗PD－1免疫治疗疗效的小鼠实验 )[J].中华核医学与分子影像杂志,2022(10):607-612

IRDye800,SnCl

肿瘤浸润,CD8 ,SPECT,免疫治疗,治疗疗效,99Tc ,尼克酰胺,HYNIC,Fab,还原剂,BALB,CT26,结直肠肿瘤,肿瘤模型,内特,特异性结合,结合能,荷瘤小鼠,后行,近红外荧光成像,HE,免疫荧光检测,测验,鼠尾,尾静脉,双因素方差分析,差异比较,PBS,胎牛血清,FBS,中放,细胞受体,人外周血,AD,10 ,摄取,肿瘤荧光,荧光强度,淋巴结,淋巴细胞浸润,浸润比例,临床预测,预测和评估,程序性细胞死亡受体,放射性核素显像,治疗结果

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