目的:观察艾灸督脉穴对APP/PS1双转基因小鼠自噬溶酶体功能及长链非编码RNA H19(lncRNA H19)的影响,探讨艾灸治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法:6月龄健康雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、艾灸组、艾灸+抑制剂组和雷帕霉素组,每组13只,同时选取13只6月龄健康雄性C57BL/6J小鼠作为对照组.艾灸组予隔附子饼灸"百会"及悬灸"大椎""风府",15 min/d;艾灸+抑制剂组在艾灸组基础上给予腹腔注射3-甲基腺嘌呤1.5 mg·kg-1·d-1;雷帕霉素组仅腹腔注射雷帕霉素2 mg·kg-1·d-1.以上各组均每日干预1次,共2周.以Morris水迷宫实验检测干预前后小鼠学习记忆能力;透射电镜观察小鼠海马组织自噬体形成;免疫组织化学法检测小鼠海马区β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42蛋白表达;荧光定量PCR法检测小鼠海马组织lncRNA H19、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转录因子EB(TFEB)、溶酶体水解酶Cathepsin D、溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)mRNA的表达;Western blot法检测小鼠海马组织mTOR、TFEB、Cathepsin D、LAMP1、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p62蛋白表达.结果:治疗前,与正常组比较,模型组、艾灸组、艾灸+抑制剂组和雷帕霉素组逃避潜伏期延长(P<0.05).治疗后,与正常组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05);海马神经元细胞质内自噬泡减少,自噬溶酶体结构破坏;Aβ1-42蛋白表达、lncRNA H19表达、mTOR mRNA和蛋白表达、p62蛋白表达均升高(P<0.05),TFEB、Cathepsin D、LAMP1 mRNA和蛋白表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均降低(P<0.05).与模型组和艾灸+抑制剂组比较,艾灸组和雷帕霉素组逃避潜伏期缩短(P<0.05);海马神经元细胞质内自噬泡较多,自噬溶酶体结构清晰完整;Aβ1-42蛋白表达、lncRNA H19表达、mTOR mRNA和蛋白表达、p62蛋白表达均降低(P<0.05),TFEB、Cathepsin D、LAMP1 mRNA和蛋白表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高(P<0.05).结论:艾灸督脉可能通过下调lncRNA H19表达抑制mTOR/TFEB通路,改善AD小鼠自噬溶酶体功能,恢复自噬流,促进细胞自噬清除脑内Aβ,进而改善认知功能.

阿尔茨海默病;艾灸;学习认知能力;自噬;长链非编码RNA H19;mTOR/TFEB通路;海马

贾玉梅;朱才丰;杨坤;贺成功;吴洋洋;王玲;宋任飞;张佳玉;王弛

安徽中医药大学研究生院,合肥230038;安徽中医药大学第二附属医院,合肥230061

针刺研究

[1]贾玉梅;朱才丰;杨坤;贺成功;吴洋洋;王玲;宋任飞;张佳玉;王弛-.艾灸督脉对APP/PS1双转基因小鼠mTOR/TFEB通路介导的自噬溶酶体功能及lncRNA H19表达的影响)[J].针刺研究,2022(08):665-672

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