目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)是否可以通过调节肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)自噬而影响糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾纤维化进程,并探讨其可能机制.方法:将12只C57BL/6小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组和糖尿病(diabetes mellitus,DM)组,每组各6只,用链脲佐菌素(55 mg/kg,腹腔注射,每天1次,连续5 d)复制小鼠1型DM模型.16周时处死小鼠后检测血糖和24 h尿总蛋白;HE和Masson染色观察肾组织病理形态改变;免疫组织化学染色观察肾组织E2F1表达情况;Western blot和RT-qPCR检测肾组织E2F1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、自噬及纤维化相关指标表达的变化.高糖培养RTECs并分别转染敲减或过表达E2F1的质粒,Western blot法检测相关指标蛋白的表达情况.结果:与NC组相比,DM组小鼠血糖和24 h尿总蛋白均显著增高(P<0.05).HE和Masson染色观察到DM组小鼠肾小管管腔塌陷,肾小球基底膜增厚,且肾间质有大量胶原纤维沉积.RT-qPCR结果显示,与NC组相比,DM组小鼠E2F1、III型胶原(collagen typeⅢ,ColⅢ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA表达上调(P<0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA表达下调(P<0.05).Western blot结果显示,与NC组比较,DM组小鼠肾组织及高糖培养的RTECs中E2F1、mTOR、自噬降解底物蛋白P62、ColⅢ和α-SMA的蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)/LC3-I比值降低(P<0.05).与空载体组相比,在高糖状态下转染敲减E2F1表达的质粒后,RTECs中mTOR、P62、ColⅢ和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值升高(P<0.05);而过表达E2F1后,mTOR、P62、ColⅢ和α-SMA的蛋白表达增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值降低(P<0.05).结论:E2F1/mTOR可通过抑制RTECs自噬水平而促进小鼠DN肾纤维化进程.

E2F转录因子1;自噬;肾间质纤维化;糖尿病肾病

邹琴;李清璇;屈玲玲;安小敏;黄靖惠;王金艳;龙天华;石明隽

贵州医科大学病理生理学教研室,贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室,贵州贵阳550025

中国病理生理杂志

[1]邹琴;李清璇;屈玲玲;安小敏;黄靖惠;王金艳;龙天华;石明隽-.E2F1调节肾小管上皮细胞自噬对小鼠糖尿病肾病肾纤维化的作用研究)[J].中国病理生理杂志,2022(06):1046-1055

E2F1,肾小管上皮细胞,细胞自噬,糖尿病肾病,肾纤维化,transcription,renal,tubular,epithelial,cells,RTECs,diabetic,nephropathy,DN,可能机制,C57BL,正常对照,normal,control,NC,diabetes,mellitus,DM,链脲佐菌素,腹腔注射,处死,总蛋白,HE,Masson,肾组织病理,病理形态,形态改变,免疫组织化学染色,blot,qPCR,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,mammalian,target,rapamycin,mTOR,纤维化相关指标,转染,敲减,过表达,质粒,管管,管腔,塌陷,肾小球基底膜,增厚,胶原纤维沉积,III,collagen,type,Col,平滑肌肌动蛋白,smooth,muscle,actin,SMA,上皮钙黏素,cadherin,底物,P62,蛋白表达水平,微管,轻链,microtubule,associated,protein,light,chain,LC3,空载,高糖状态,而过,肾间质纤维化

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