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基于重组酶聚合酶扩增的曼氏血吸虫核酸可视化检测技术的建立及初步评价
文献摘要：
目的 结合重组酶聚合酶扩增技术(RPA)和侧流层析试纸条(LFD),建立一种快速、便捷的曼氏血吸虫核酸可视化检测方法,并初步评价其检测效能.方法 以曼氏血吸虫细胞色素c氧化酶亚基1(SmCOX1)基因为靶序列,利用Primer Primer 5软件结合手工辅助,设计特异性引物和探针并进行筛选,建立曼氏血吸虫核酸LFD-RPA检测方法.制备不同浓度(1ng/μl、100 pg/μl、10 pg/μl、1 pg/μl、100fg/μl、10 fg/μl、1 fg/μl、0.1 fg/μl)的曼氏血吸虫成虫基因组DNA和含有不同拷贝数浓度(105、104、103、102、101、100、10-1拷贝/μl)的SmCox1重组质粒DNA,评价所建立方法的敏感度.以曼氏血吸虫成虫、日本血吸虫成虫、埃及血吸虫虫卵、感染曼氏血吸虫双脐螺(阳性双脐螺)和阴性双脐螺、感染日本血吸虫钉螺(阳性钉螺)和阴性钉螺、华支睾吸虫成虫、大片形吸虫成虫、卫氏并殖吸虫成虫基因组DNA为模板,评价所建立方法的特异性.将30只雌性BALB/c小鼠随机分为40尾感染组、80尾感染组和健康对照组,每组10只,建立感染小鼠模型,提取感染后1～8周的小鼠粪样和血样DNA,评价LFD-RPA方法检测曼氏血吸虫早期感染的效能.结果 以SmCox1基因片段为靶标建立的曼氏血吸虫LFD-RPA检测方法以39℃、20 min为最佳反应温度和时间.敏感度检测结果显示,SmCox1-LFD-RPA方法对曼氏血吸虫成虫基因组、SmCox1重组质粒的检出限分别为10fg/μl和10拷贝/μl.特异性检测结果显示,SmCox1-LFD-RPA方法仅对曼氏血吸虫和阳性双脐螺DNA特异,与其他吸虫DNA无交叉反应.SmnCox1-LFD-RPA方法对感染小鼠1～8周血样及粪样DNA的检测结果显示,40尾组小鼠自感染后3周开始出现阳性条带,80尾组小鼠自感染后1周开始出现阳性条带,且条带颜色随感染时间延长逐渐加深.结论 建立了曼氏血吸虫LFD-RPA检测方法,其检出限低、特异性强,操作简单快捷.
文献关键词：
曼氏血吸虫;重组酶聚合酶;等温扩增;可视化;侧流试纸条
中图分类号：
作者姓名：
王丽萍;吕超;秦志强;许静;邓王平
作者机构：
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心),国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织热带病合作中心,国家级热带病国际研究中心,上海200025
文献出处：
引用格式：
[1]王丽萍;吕超;秦志强;许静;邓王平-.基于重组酶聚合酶扩增的曼氏血吸虫核酸可视化检测技术的建立及初步评价)[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2022(03):337-343
A类：
SmCOX1,100fg,SmCox1,10fg,SmnCox1,侧流试纸条
B类：
曼氏血吸虫,初步评价,重组酶聚合酶扩增技术,RPA,侧流层析试纸条,LFD,可视化检测方法,细胞色素,亚基,靶序列,Primer,软件结合,特异性引物,1ng,pg,成虫,拷贝数,数浓度,重组质粒,建立方法,日本血吸虫,埃及,虫虫,虫卵,钉螺,华支睾吸虫,大片,并殖吸虫,雌性,BALB,小鼠模型,粪样,血样,早期感染,靶标,反应温度,温度和时间,特异性检测,交叉反应,自感,条带,随感,检出限低,等温扩增
AB值：
0.198015
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