典型文献
辛伐他汀联合岩藻多糖给药对大鼠BMSCs成骨分化的影响
文献摘要:
目的 探究在体外成骨诱导环境下,辛伐他汀(simvastatin,SIM)联合岩藻多糖(fucoidan,FD)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化中期的影响.方法(1)从SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔中提取原代细胞,体外培养至P3代进行细胞鉴定.鉴定方法包括细胞形态学观察、流式鉴定、成脂肪鉴定和成软骨鉴定.(2)取P3代BMSCs,分为空白组(DMEM完全培养基)和试验组(含有不同FD浓度的DMEM完全培养基).①采用CCK-8法检测各组培养1、2、3天的细胞活性;②培养至第7天,提取细胞中的总RNA,采用qPCR法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)mRNR的表达情况.③培养至第7天,进行ALP定性和定量分析.综合以上结果确定FD的给药浓度.(3)取P3代BMSCs,分为对照组(OM组)、SIM组、FD组和SIM+FD组.①采用CCK-8法检测各组培养1、2、3天的细胞活性;②培养至第7天,观察细胞形态和生长状况,并拍照记录;③培养至第7天,提取细胞中的总RNA,采用qPCR法检测BMP-2、Ⅰ型胶原(Type I collagen,COLⅠ)、RUNX2以及ALP mRNA的表达情况;④培养至第7天,进行ALP定性和定量分析.结果(1)细胞鉴定.①细胞形态观察:细胞在培养过程中慢慢延伸并舒展开.3代以后,细胞形态基本趋于一致,成纤维样贴壁生长.②流式鉴定:CD29、CD90和CD44呈阳性,表达率分别为99.1%、99.5%、99.4%,CD45呈阴性,表达率为0.4%.③成脂肪鉴定:细胞在诱导过程中逐渐变圆,胞内出现折光性高、大小不一的脂滴,经油红O染色呈红色.④成软骨鉴定:细胞逐渐由长梭形变为三角形或多边形,经阿尔新兰染色,软骨基质呈蓝色,细胞核呈红色.(2)FD的给药浓度.①细胞活性:BMSCs的活性随培养时间和FD的浓度增加而增加.与空白组比较,差异均具有统计学意义(P<0.001).②qPCR:浓度为1μg/mL的FD组BMP-2和ALP mRNA表达量均高于空白组和其他实验组,差异具有统计学意义(P<0.05).③ALP定性和定量:当FD浓度为1μg/mL时,染色最深,ALP活性最高(P<0.001),说明此浓度下的FD适宜BMSCs的生长和分化.(3)两种药物联合后的促成骨效果.①细胞活性:SIM+FD组的细胞活性明显高于OM组和其他实验组(P<0.001),说明两种药物联合后对细胞增殖有促进作用;②细胞形态观察:SIM+FD组细胞生长较快,细胞数量明显多于OM组和其他实验组;③qPCR:SIM+FD组成骨相关基因mRNA的表达量均高于OM组、SIM组和FD组(P<0.001);④ALP定性和定量:定量结果表明,SIM+FD组ALP染色结果最深.定量数据同样显示联合组ALP表达量最高(P<0.001).结论 辛伐他汀联合岩藻多糖给药可明显促进大鼠BMSCs向成骨细胞分化,使得细胞活性升高,分化中期的成骨相关因子的表达量增加.
文献关键词:
辛伐他汀;岩藻多糖;骨髓间充质干细胞;成骨诱导
中图分类号:
作者姓名:
王莹;詹玉林
作者机构:
上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;上海交通大学附属第六人民医院骨科,上海 200233
文献出处:
引用格式:
[1]王莹;詹玉林-.辛伐他汀联合岩藻多糖给药对大鼠BMSCs成骨分化的影响)[J].山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报,2022(12):897-905
A类:
脂肪鉴定,mRNR,SIM+FD
B类:
辛伐他汀,岩藻多糖,药对,BMSCs,成骨分化,成骨诱导,simvastatin,fucoidan,骨髓间充质干细胞,bone,mesenchymal,stem,cells,成骨细胞分化,股骨,胫骨,骨髓腔,原代细胞,体外培养,P3,细胞鉴定,鉴定方法,细胞形态学,形态学观察,成脂,成软骨,DMEM,CCK,组培,细胞活性,qPCR,碱性磷酸酶,alkaline,phosphatase,ALP,骨形态发生蛋白,morphogenetic,protein,BMP,定性和定量分析,给药浓度,OM,生长状况,拍照,照记,Type,collagen,COL,RUNX2,形态观察,培养过程,慢慢,舒展,贴壁,CD29,CD90,CD44,CD45,变圆,折光,大小不一,脂滴,三角形,多边形,软骨基质,蓝色,细胞核,培养时间,最深,药物联合,促成骨,细胞生长,细胞数量,成骨相关基因,染色结果,定量数据,相关因子
AB值:
0.287525
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