典型文献
肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证
文献摘要：
目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价.方法 将融合至90％的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培养液,第2周起每日更换培养液,直至培养第21天.细胞培养第3、5、7、15、19、21天,使用细胞电阻仪测定跨膜电阻(TER);细胞培养第5、15、21天,取细胞单层顶侧与基底侧培养基并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,计算顶侧与基底侧ALP活力比;取体外分化培养21天的Caco-2细胞,使用多功能酶标仪检测大分子物质荧光黄(FD-4)通过单层细胞的百分率(即FD-4通透率)及跨膜转运表观渗透系数(Papp),透射电镜下观察细胞形态.结果 Caco-2细胞体外分化培养第3、5、7、15天的TER均明显低于第19、21天(P均<0.05),Caco-2细胞体外分化培养第19和21天TER比较无统计学差异(P>0.05).Caco-2细胞体外分化培养第5、15、21天顶侧与基底侧ALP活力比分别为1.43±0.16、2.43±0.28、4.85±0.25,Caco-2细胞体外分化培养第5、15天顶侧与基底侧ALP活力比均明显低于第21天(P均<0.05).体外分化培养第21天的Caco-2细胞FD-4通透率为2.31％±1.12％,Papp为(1.95±0.90)×10-7 cm/s.透射电镜观察结果显示,体外分化培养第21天的Caco-2细胞由微绒毛形成的刷状缘排列整齐致密;细胞顶侧面分化出完整的紧密连接结构,表现为连续的融合点,呈"焊接线"样围绕在细胞膜的顶部,相邻细胞膜被"焊接"在一起,形成绳索样结构.结论 Caco-2细胞在Transwell板体外分化21天后可形成肠上皮细胞紧密连接结构,证实成功构建肠上皮细胞紧密连接模型.
文献关键词：
细胞紧密连接;肠上皮细胞;跨膜电阻;碱性磷酸酶;荧光黄通透率
中图分类号：
作者姓名：
陈婷;张娇;王晓鸽;康楠;王凤云;唐旭东
作者机构：
中国中医科学院西苑医院脾胃病研究所,北京100091;北京市昌平区中医医院脾胃病科;河南中医药大学附属第一医院脾胃肝胆科;济宁医学院附属医院中医科
文献出处：
引用格式：
[1]陈婷;张娇;王晓鸽;康楠;王凤云;唐旭东-.肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证)[J].山东医药,2022(35):1-4
A类：
荧光黄通透率
B类：
肠上皮细胞,细胞紧密连接,建立与验证,体外分化,Caco,Transwell,MEM,细胞悬液,隔日,培养液,细胞培养,跨膜电阻,TER,碱性磷酸酶,ALP,分化培养,酶标仪,大分子物质,FD,单层细胞,百分率,跨膜转运,表观渗透系数,Papp,透射电镜,细胞形态,细胞体,统计学差异,天顶,电镜观察,微绒毛,整齐,连接结构,融合点,接线,细胞膜,绳索,板体
AB值：
0.229951
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