目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)浓度对调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)表达的影响.方法 贴壁法提取大鼠BMMSCs并传代培养至P4代,油红O染色法及钙盐染色法测定P3代成脂及成骨诱导能力.倒置显微镜下标记CD29、CD90、CD45荧光抗体.磁珠法分选大鼠CD4+T细胞,流式细胞仪测定细胞纯度.将CD4+T细胞与浓度不同的BMMSCs(0.5倍、1倍、2倍、4倍浓度组)共培养3 d,流式细胞仪测定Treg、Th17增值比例,流式微球分析法检测转化生长因子-β(TGF-β)及白介素(IL-6、IL-10、IL-17)水平.结果 本研究P4代BMMSCs形态均匀,且呈梭形紧密排列,成脂诱导后镜下呈现橘红色脂肪小滴,成骨诱导后镜下呈现黑钙盐结节.CD90、CD29于BMMSCs表面阳性表达,CD45弱表达.磁珠法分选出CD4+T细胞约(5.75±0.36)×106个/ml,细胞纯度>95％.共培养后,在Treg增殖比例上,2倍>1倍>0.5倍>4倍浓度组,2倍浓度组与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05).在Th17增殖比例上,1倍>2倍>0.5倍>4倍浓度组,0.5倍浓度组与各组组间比较,4倍浓度组与1倍、2倍浓度组比较,差异有统计学意义(P<0.05).在TGF-β水平上,1倍>2倍>4倍>0.5倍浓度组,1倍浓度组与0.5倍、4倍浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).在IL-10水平上,2倍>1倍>4倍>0.5倍浓度组,0.5倍浓度组与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05).在IL-6、IL-17水平上,各组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 BMMSCs具多向分化潜能,CD4+T细胞分化成Treg、Th17的增殖比例受到BMMSCs浓度的影响,较高浓度时增殖效应最强,高浓度时抑制增殖,两者增殖比例变化与相关因子表达水平并不同步.

骨髓间充质干细胞;调节性T细胞;辅助性T细胞17;浓度调节

阮鹏;曾毅;胡颖嵩

武汉中核中同蓝博医学检验实验室有限公司检验部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院检验科,湖北武汉 430000

中国医药科学

[1]阮鹏;曾毅;胡颖嵩-.骨髓间充质干细胞浓度调节Treg/Th17表达的研究)[J].中国医药科学,2022(05):31-35

流式微球分析法

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