目的 本研究旨在探讨甲基莲心碱(Nef)对视网膜母细胞瘤(RB)细胞WERI-Rb1增殖和侵袭能力的影响.方法 以RB细胞系WERI-Rb1为体外模型,以4周雌性无胸腺裸鼠为异种移植模型.细胞计数试剂-8(CCK-8)测定不同浓度Nef对细胞活力的影响.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色测定细胞增殖能力,Transwell测定细胞侵袭能力,免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤肿瘤组织中细胞增殖标志物Ki-67抗原(Ki67)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达量,Western Blot法检测WERI-Rb1细胞和肿瘤组织中Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、MMP-9、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)蛋白表达水平.结果(1)细胞活力:与Nef 0.5μM组相比,5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0μM组的细胞活力均降低,差异具有统计学意义(t5.0=8.298,P=0.001;t10.0=11.354,t20.0=12.713,t40.0=16.228,t80.0=23.380,t160.0=23.765,均P=0.000),选择0、2.5、5.0、10.0μM进行后续试验.(2)细胞增殖能力:与Nef 0μM组相比,5.0、10.0μM组的阳性细胞数和Ki67、PCNA蛋白表达水平均降低,差异具有统计学意义(阳性细胞数:t5.0=5.857,P=0.004;t10.0=8.770,P=0.001.Ki67:t5.0=3.286,P=0.030;t10.0=5.060,P=0.007;PCNA:t5.0=6.059,P=0.004;t10.0=8.109,P=0.001).(3)细胞侵袭能力:与Nef 0μM组相比,5.0、10.0μM组的细胞侵袭数目和MMP-9蛋白表达水平均降低,差异具有统计学意义(细胞侵袭数目:t5.0=7.203,P=0.002;t10.0=10.847,P=0.000.MMP-9:t5.0=4.323,P=0.012;t10.0=8.216,P=0.001),10.0μM组的MMP-14蛋白表达水平降低(t=5.051,P=0.007),5.0μM组的MMP-14蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).(4)裸鼠移植瘤肿瘤组织:与Nef 0 mg/kg组相比,1.0、2.0 mg/kg组的肿瘤重量、肿瘤体积和Ki67、MMP-9阳性细胞数均降低,差异具有统计学意义(肿瘤重量:t1.0=6.261,t2.0=12.969,均P=0.000.肿瘤体积:t1.0=10.023,t2.0=18.952,均P=0.000.Ki67:t1.0=5.599,P=0.001;t2.0=8.188,P=0.000.MMP-9:t1.0=13.461,t2.0=19.931,均P=0.000).结论 Nef可抑制RB细胞WERI-Rb1的增殖和侵袭能力.

甲基莲心碱;视网膜母细胞瘤细胞;增殖;侵袭;裸鼠

辽阳市中心医院,辽阳111010;中国医科大学附属第一医院,沈阳110001

[1]潘学良;洪薇薇;赵海雁;郑茜;王丽茹;张旭-.甲基莲心碱对视网膜母细胞瘤WERI-Rb1细胞增殖和侵袭的影响)[J].中国中医眼科杂志,2022(08):594-600

t20,t40,t80,t160

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