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免疫缺陷小鼠体内人源T淋巴细胞亚群流式检测方法研究
文献摘要：
目的 比较流式细胞术(FCM)与活体成像法、qPCR法识别外周血CAR+细胞的结果,验证其结果的可靠性和灵敏性.方法 分别给予免疫缺陷型荷瘤(Raji-Luc细胞造模)小鼠溶媒、CAR-T1或CAR-T2细胞.在不同时间点测定动物体内Raji-Luc细胞的荧光强度,FCM法测定人源T淋巴细胞和CAR-T细胞中的CD3+CD4+和CD3+CD8+个数,并使用qPCR法检测外周血中每纳克基因组DNA中CAR-T1和CAR-T2拷贝数.结果 CAR-T1组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第5～7周大幅增加.CAR-T2组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第10～14天大幅增加,之后大幅降低,给予细胞后第4周降至基线且未见再次扩增.CAR-T细胞的流式检测结果与活体成像结果基本相符,且与qPCR法检测外周血中CAR-T细胞的分布趋势基本一致.此外,EDTA-K2抗凝剂对FITC标记的抗CD8+抗体有较明显的影响,导致标记为CD3+CD8+的细胞群左移且检测结果为零.结论 对不同增殖特性的CAR-T细胞,流式检测结果与其体内肿瘤杀伤情况相关,且比qPCR法更为准确和灵敏,为CAR-T细胞的非临床安全性评价试验设计提供有益借鉴.
文献关键词：
嵌合抗原受体T细胞免疫疗法;生物分布;流式细胞术;抗凝剂
中图分类号：
作者姓名：
姜华;黄瑛;李路路;王晓姝;兰洁;侯田田;耿兴超;刘丽;文海若
作者机构：
100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室
文献出处：
引用格式：
[1]姜华;黄瑛;李路路;王晓姝;兰洁;侯田田;耿兴超;刘丽;文海若-.免疫缺陷小鼠体内人源T淋巴细胞亚群流式检测方法研究)[J].中国医药生物技术,2022(04):306-312
A类：
CAR+
B类：
免疫缺陷小鼠,内人,淋巴细胞亚群,流式细胞术,FCM,活体成像,成像法,qPCR,灵敏性,荷瘤,Raji,Luc,溶媒,不同时间点,动物体,荧光强度,定人,CD3+CD4+,CD3+CD8+,纳克,拷贝数,细胞数量,天大,EDTA,K2,抗凝剂,FITC,记为,左移,同增,增殖特性,杀伤,伤情,非临床安全性评价,嵌合抗原受体,细胞免疫疗法,生物分布
AB值：
0.292969
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