[目的]本研究旨在比较不同RNAi方法对沙葱萤叶甲Galeruca daurica幼虫热激蛋白基因(GdHsp60和QdHsp70)的沉默效率,以选择一种可高效降低靶基因表达水平的研究方法,明确这两个热激蛋白在沙葱萤叶甲幼虫抗寒性中的作用.[方法]分别通过饲喂法和显微注射法进行RNAi沉默沙葱萤叶甲1和2龄幼虫的GdHsp60和GdHsp70,采用qPCR检测GdHsp60和GdHsp70的沉默效率;通过显微注射法分别对GdHsp60和GdHsp70进行RNAi后24 h,用热电偶法测定沙葱萤叶甲2龄幼虫过冷却点和结冰点,生物测定沙葱萤叶甲2龄幼虫暴露于不同低温条件下(-6～-14℃)2 h的半致死温度(Ltemp50)以及在-5℃低温条件下处理不同时间后的半致死时间(Ltime50).[结果]用饲喂法和显微注射法进行RNAi均可以降低GdHsp60和GdHsp70的表达水平,但显微注射法的沉默效率更高.与对照组(显微注射dsGFP)相比,沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后,GdHsp60和GdHsp70的表达水平均降至最低,分别降低了 84.15％和92.38％.在沙葱萤叶甲2龄幼虫中,显微注射dsGdHsp60 24 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及 Ltime50值分别为-10.56±0.42℃,-7.66±0.56℃,-8.33℃和 49.25 h,显微注射 dsGdHsp7024 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及Ltime50 值分别为-9.08±0.23℃,-6.09±0.28℃,-8.20℃和 52.21 h,而对照组的分别为-14.71±0.11℃,-13.94±0.09℃,-10.63℃和 87.13 h.与对照组(显微注射dsGFP)相比,在沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后过冷却点、结冰点和Ltemp50显著上升,而Ltime50值显著缩短.[结论]显微注射法可作为沙葱萤叶甲Hsp相关基因RNAi的主要干扰方法;沉默GdHsp60和GdHsp70基因均会显著降低了沙葱萤叶甲幼虫的抗寒能力.

沙葱萤叶甲;热激蛋白;GdHsp60;GdHsp70;RNAi;抗寒性

张宏玲;任浩;李凯旋;田宇;张恒;李艳艳;李玲;庞保平;谭瑶

内蒙古农业大学草原昆虫研究中心,呼和浩特010019;镶黄旗草原工作站,内蒙古镶黄旗013250;正镶白旗草原工作站,内蒙古正镶白旗013800

昆虫学报

[1]张宏玲;任浩;李凯旋;田宇;张恒;李艳艳;李玲;庞保平;谭瑶-.RNAi介导的GdHsp60和GdHsp70基因沉默对沙葱萤叶甲幼虫抗寒性的影响)[J].昆虫学报,2022(07):807-817

GdHsp60,GdHsp70,沙葱萤叶甲,Galeruca,QdHsp70,Ltemp50,Ltime50,dsGdHsp60,dsGdHsp70,dsGdHsp7024

RNAi,基因沉默,幼虫,抗寒性,daurica,热激蛋白基因,靶基因,基因表达水平,饲喂,显微注射,注射法,qPCR,热电偶,过冷却点,结冰点,生物测定,低温条件,半致死温度,下处,半致死时间,dsGFP,抗寒能力

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