典型文献
CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用
文献摘要：
为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)在线设计工具,针对人β-珠蛋白(HBB)基因设计小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建PX459-sgRNA-Cas9共表达质粒,然后以含阻断突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(single-stranded Oligo DNA Nucleotides,ssODNs)为同源模板,通过脂质体转染HEK293T细胞,并通过Sanger测序和酶切(T7EⅠ和AatⅡ)检测编辑效率,最后通过Sanger测序分析敲除HBB单克隆细胞的基因型.结果表明,成功构建β-地中海贫血(简称β-地贫)HBB-28(A>G)基因纯合定点突变的HEK293T细胞株.阻断突变碱基优化的ssODNs减少Cas9蛋白对靶点的再次编辑,提高了整合效率.本研究建立的新型点突变技术可以高效获得纯合定点突变的HEK293T细胞株,既为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,又为基因修复治疗提供高效的方法.
文献关键词：
β-地中海贫血;HBB;阻断突变;定点突变;基因修复治疗
中图分类号：
作者姓名：
刘永祥;麦庆云;黎允诗;梅珺琰;梁爱军;彭新良;周瑞鸿;周少虎
作者机构：
广州中医药大学第一附属医院生殖医学科,广东广州 510405;中山大学附属第一医院生殖医学中心,广东广州 510080;广州医药研究总院有限公司,广东广州 510220
文献出处：
引用格式：
[1]刘永祥;麦庆云;黎允诗;梅珺琰;梁爱军;彭新良;周瑞鸿;周少虎-.CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用)[J].广西科学,2022(06):1125-1133
A类：
CORRECT,阻断突变,Erase,PX459,ssODNs,T7E,Aat,基因修复治疗
B类：
HBB,基因定点突变,变细,细胞株,CRISPR,Cas9,Consecutive,Guide,steps,blocked,Targets,使用规律,规律间隔成簇短回文重复序列,Clustered,Regularly,Interspaced,Short,Palindromic,Repeats,在线设计,设计工具,珠蛋白,向导,small,guide,sgRNA,共表达,质粒,单链,寡核苷酸,single,stranded,Oligo,Nucleotides,脂质体转染,HEK293T,Sanger,编辑效率,测序分析,敲除,单克隆细胞,基因型,地中海贫血,地贫,合定,对靶,整合效率,既为,单碱基突变,疾病模型
AB值：
0.358497
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
