目的:通过检测复发性流产(RSA)中活性维生素D(VD)与维生素D受体(VDR)的表达,初步研究其相关作用和分子机制.方法:免疫组化(IHC)与RT-PCR法检测20例RSA患者(RSA组)与20例自愿选择终止妊娠的正常对照女性(对照组)胎盘绒毛组织中VD关键代谢酶25-羟基维生素D3-1α-羟化酶(CYP27B1)与VDR的表达,Western blot法检测两组绒毛组织中自噬关键蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值和p62蛋白表达水平.体外培养滋养细胞系HTR8/SVneo,利用脂质体转染技术将沉默VDR的siRNA(si-VDR)与阴性对照siRNA(si-NC)转染入细胞,RT-PCR与Western blot法检测转染效率.按处理条件不同,将滋养细胞分为4组:si-NC组,活性VD处理转染si-NC或si-VDR的si-NC+VD组、si-VDR+VD组,联合使用VD与自噬抑制剂3-MA处理的si-NC+VD+3-MA组.MTT与EdU法检测各组滋养细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组滋养细胞侵袭能力;透射电镜观察各组滋养细胞中自噬囊泡数;免疫荧光检测细胞中LC3B表达水平;Western blot实验检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和p62蛋白表达;Western blot实验明确各组滋养细胞中AMPK/mTOR途径的AMPK(p-AMPK/AMPK)与mTOR(p-mTOR/mTOR)磷酸化水平.结果:与对照组相比,RSA组胎盘绒毛组织中CYP27B1与VDR表达和自噬水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与转染si-NC的滋养细胞相比,转染si-VDR能明显下调VDR的mRNA与蛋白表达(均P<0.01);与si-NC组相比,si-NC+VD组的细胞增殖、侵袭和自噬能力均显著增加(P<0.05),AMPK(p-AMPK/AMPK)磷酸化水平明显升高(P<0.05),mTOR(p-mTOR/mTOR)的磷酸化水平显著降低(P<0.05).si-VDR+VD组上述细胞功能或检测指标无明显改变(P>0.05),而si-NC+VD+3-MA组均明显降低(P<0.05).与si-NC+VD组相比,si-VDR+VD组与si-NC+VD+3-MA组的上述细胞功能改变均明显降低(P<0.05),但AMPK(p-AMPK/AMPK)磷酸化水平显著降低(P<0.05),而mTOR(p-mTOR/mTOR)磷酸化水平显著增加(P<0.05).结论:RSA患者胎盘绒毛组织中VD的代谢与VDR表达和自噬水平均较正常妊娠女性显著降低,而外源性予以活性VD能通过AMPK/mTOR信号通路调控滋养细胞的自噬,从而促进其增殖与侵袭功能.

复发性流产;活性维生素D3;滋养细胞;自噬;侵袭;增殖

周立花;胡英;邹晖

海南医学院第二附属医院生殖科,海口 570311

现代妇产科进展

[1]周立花;胡英;邹晖-.复发性流产中活性维生素D3与维生素D3受体的表达及其对滋养细胞增殖与侵袭的调控和机制研究)[J].现代妇产科进展,2022(07):513-520

NC+VD,VDR+VD,NC+VD+3

复发性流产,D3,增殖与侵袭,RSA,免疫组化,IHC,终止妊娠,正常对照,胎盘绒毛组织,代谢酶,基维,羟化酶,CYP27B1,blot,关键蛋白,p62,蛋白表达水平,体外培养,细胞系,HTR8,SVneo,脂质体转染,siRNA,转染效率,处理条件,联合使用,自噬抑制剂,MA,MTT,EdU,细胞的增殖,Transwell,实验检测,滋养细胞侵袭,细胞侵袭能力,透射电镜,电镜观察,囊泡,免疫荧光检测,LC3B,验明,AMPK,mTOR,磷酸化,细胞功能,检测指标,功能改变,较正,正常妊娠,妊娠女性,而外,外源性

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