目的:探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响.方法:取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞.将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L-1)雷帕霉素组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平.结果:PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配.与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05);与GES-1细胞比较,MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05).与空白组比较,0.25和0.50 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L-1雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多.激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L-1雷帕霉素组比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01).与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率升高(P<0.05),S期细胞百分率降低(P<0.01),G2期细胞百分率降低(P<0.05),细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低(P<0.05);与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率降低(P<0.01),S期细胞百分率升高(P<0.05),G2期细胞百分率升高(P<0.05),E-钙黏蛋白表达水平降低(P<0.05),Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高(P<0.05).结论:胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程.

hsa_circ_0009735;胃肿瘤;上皮间质转化;迁移;细胞周期;自噬

刘云;朱琳琦;邵世和

江苏大学医学院检验医学研究所微生物学及检验教研室,江苏 镇江 212013

吉林大学学报（医学版）

[1]刘云;朱琳琦;邵世和-.环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(06):1498-1509

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