目的 探讨线粒体钙离子单向转运蛋白(MCU)在丁酸钠(NaB)抗结直肠癌(CRC)中的作用及可能机制.方法 单独用0、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 mmol/L NaB处理CRC HCT-116细胞24 h,MTT检测细胞活力.分别用50μmol/L自噬抑制剂氯喹(CQ)、30μmol/L凋亡抑制剂Z-VAD-FMK、30μmol/L坏死抑制剂Necrostatin-1、2 mmol/L活性氧(ROS)拮抗剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、0.5 mmol/L精胺(Sp)和钌红(RR)预处理HCT-116细胞1 h,再给予5 mmol/L NaB处理24 h,MTT检测细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞自噬,荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞ROS含量,RT-PCR检测MCU mRNA水平,蛋白质印迹检测细胞MCU、p62、LC3-Ⅱ和PARP剪切体c-PARP蛋白水平.结果 MTT结果显示,对照组细胞存活率为(100.00±6.79)％,NaB组为(43.99±2.63)％,t=7.219,P<0.001.与单独NaB组比较,NaB+NAC组细胞存活率为(71.98±2.40)％,t=-7.329,P<0.001;NaB+RR组为(60.44±5.12)％,t=-3.151,P<0.05.荧光显微镜观察发现,NaB组细胞核呈皱缩浓染,细胞内酸性囊泡增多.荧光探针DCFH-DA结果显示,5 mmol/L NaB可增加HCT-116细胞绿色荧光强度,NAC+NaB组相较于单独NaB组可减少HCT-116细胞绿色荧光强度,Sp+NaB、RR+NaB组相较于单独NaB组分别进一步增加和减少HCT-116细胞绿色荧光强度.RT-PCR实验结果显示,对照组MCU mRNA相对表达量为1.00±0.11,NaB组为5.08±0.16,t=-36.265,P<0.001.蛋白质印迹实验结果显示,对照组MCU蛋白相对表达量为0.44±0.18,NaB组为1.47±0.46,t=-3.565,P<0.05.NAC预处理后蛋白质印迹实验析因设计结果显示,NaB组p62蛋白相对表达量为0.29±0.03,NAC组为0.90±0.08,NaB+NAC组为0.86±0.07,FNaB=8.846,FNAC=28.994,FNaB×NAC=6.220,均P<0.05;NaB组LC3-Ⅱ蛋白相对表达量为3.95±1.03,NAC组为0.97±0.25,NaB+NAC组为2.19±0.61,FNaB=34.512,FNAC=6.398,FNaB×NAC=5.964,均P<0.05.NaB组cPARP蛋白相对表达量为1.16±0.12,NAC组为0.60±0.13,NaB+NAC组为0.75±0.07,FNaB=36.763,FNAC=3.376,FNaB×NAC=15.975,PNaB<0.05,PNaB×NAC<0.05,PNAC>0.05.RR预处理后蛋白质印迹实验析因设计结果显示,NaB组p62蛋白相对表达量为0.49±0.12,RR组为1.75±0.22,NaB+RR组为0.72±0.06,FNaB=54.538,FRR=19.903,FNaB×RR=5.410,均P<0.05.NaB组LC3-Ⅱ蛋白相对表达量为1.14±0.19,RR组为0.87±0.10,NaB+RR组为0.85±0.20,FNaB=8.974,FRR=0.008,FNaB×RR=10.311,PRR>0.05,PNaB<0.05,PNaB×RR<0.05.NaB组cPARP蛋白相对表达量为0.99±0.21,RR组为0.46±0.16,NaB+RR组为0.51±0.06,FNaB=6.846,FRR=5.133,FNaB×RR=7.298,PNaB<0.05,PNaB×RR<0.05,PRR>0.05.结论 NaB可通过MCU诱导CRC细胞产生ROS抑制细胞增殖,并促发自噬和凋亡.

NaB;CRC;MCU;ROS;自噬;凋亡

秦勇;孙小蝶;刘璐琳;卞中博;张秋玉;孙素霞

南方医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学系,广东 广州 510515

中华肿瘤防治杂志

[1]秦勇;孙小蝶;刘璐琳;卞中博;张秋玉;孙素霞-.线粒体钙离子单向转运蛋白对丁酸钠抗结直肠癌的作用及机制)[J].中华肿瘤防治杂志,2022(20):1467-1474

NaB+NAC,NaB+RR,NAC+NaB,Sp+NaB,RR+NaB,FNaB,cPARP,PNaB

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