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向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立
文献摘要：
向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物.为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了 RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法.通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌.荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg.由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测.
文献关键词：
向日葵黑茎病菌;RPA;CRISPR-Cas12a;荧光检测;侧向流层析试纸条
中图分类号：
作者姓名：
邝瑞瑞;雷荣;江丽;段维军;李雪莲;符娜;范在丰;李远;吴品珊
作者机构：
中国检验检疫科学研究院,北京 100176;中国农业大学植物保护学院,北京 100093;宁波检验检疫科学技术研究院,宁波 315012;伊犁师范大学,伊犁 835000;重庆医科大学永川附属医院,重庆 402177
文献出处：
引用格式：
[1]邝瑞瑞;雷荣;江丽;段维军;李雪莲;符娜;范在丰;李远;吴品珊-.向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立)[J].植物保护,2022(06):69-76,89
A类：
向日葵黑茎病菌
B类：
RPA,CRISPR,Cas12a,快速检测方法,毁灭性,植物检疫,检疫性有害生物,准确快速,测向,究根,近似种,ITS,序列差异,引物,crRNA,等温扩增技术,技术结合,条件优化,检测体系,恒温,特异性检测,荧光法,检测灵敏度,pg,肉眼,于田,田间,口岸,早期检测,荧光检测,灵敏度高,环境要求,实验室检测,侧向流层析试纸条
AB值：
0.281417
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