典型文献
RSV感染气液相界面培养人支气管上皮细胞模型的建立及其对HMGB1和pMLKL表达的影响
文献摘要：
目的 构建呼吸道合胞病毒(RSV)感染气液相界面(ALI)培养的人支气管上皮细胞(hBEC)模型,为深入研究呼吸道病毒致病机制提供更接近体内环境的细胞模型;通过分析RSV感染对高迁移率族蛋白1(HMGB1)和磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域(pMLKL)表达的影响,探讨RSV感染损伤支气管上皮的致病机制.方法 将hBEC接种到Transwell膜上,进行液体浸没式培养,细胞汇合度达100％后转ALI培养,倒置显微镜观察细胞生长状态.细胞分化成熟后按照以下分组分别感染RSV病毒:6 h对照组,6 h感染复数(MOI)1.0组,6 h MOI 3.0组,24 h对照组,24 h MOI 1.0组,24 h MOI 3.0组.每组3个复孔.通过免疫荧光染色确认RSV感染效果和RSV感染对细胞核蛋白HMGB1和pMLKL表达的影响.结果 经细胞扩展期液体浸没式培养4～10 d后,细胞汇合度达100％.转ALI培养约4周后,细胞条索状分布越来越清晰,且分泌肉眼可见的黏液,形成黏液层,将Transwell膜石蜡包埋切片,得到典型的假复层上皮HE染色结果.经抗RSV抗体免疫荧光染色确认,MOI为3.0感染24 h RSV病毒成功感染细胞;抗HMGB1和抗pMLKL免疫荧光双染色结果显示,该感染条件下,细胞核内出现粉色荧光[为蓝色4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和红色HMGB1荧光Merge结果],证实RSV感染后出现HMGB1核表达;而RSV感染前后均未见pMLKL表达.结论 通过在Transwell膜上液体浸没式扩展培养和ALI分化培养,可获得分化良好的hBEC,且能较长时间维持其形态及功能,可为呼吸道病毒感染及其他常见呼吸道疾病研究提供更接近体内环境的细胞模型.在MOI 3.024 h条件下,RSV成功感染该细胞模型,并引起损伤相关分子蛋白HMGB1核表达.
文献关键词：
人支气管上皮细胞;气液相界面培养;呼吸道合胞病毒;高迁移率族蛋白1;磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域
中图分类号：
作者姓名：
王娟;廖焕金;李延宁;戈伊芹;李佳
作者机构：
上海交通大学附属第一人民医院检验医学中心,上海 200080
文献出处：
引用格式：
[1]王娟;廖焕金;李延宁;戈伊芹;李佳-.RSV感染气液相界面培养人支气管上皮细胞模型的建立及其对HMGB1和pMLKL表达的影响)[J].检验医学,2022(02):177-182
A类：
气液相界面培养,pMLKL,hBEC
B类：
RSV,人支气管上皮细胞,细胞模型,HMGB1,呼吸道合胞病毒,ALI,致病机制,高迁移率族蛋白,磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域,Transwell,浸没式,汇合,倒置,细胞生长,生长状态,细胞分化,分化成,复数,MOI,免疫荧光染色,细胞核,核蛋白,条索状,肉眼,黏液层,石蜡包埋,复层,HE,染色结果,成功感,免疫荧光双染,粉色,蓝色,苯基,吲哚,DAPI,Merge,分化培养,较长时间,呼吸道病毒感染,呼吸道疾病,疾病研究,损伤相关分子
AB值：
0.20289
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