目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法.方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光PCR检测方法.PCR反应体系为Premix Ex Taq(Probe qPCR)10μL,人参上下游引物各0.5μL,西洋参上下游引物各0.3μL,人参与西洋参特异性探针各0.4μL,DNA模板2μL,灭菌去离子水补至20μL.反应条件为95℃预变性30 s;然后以95℃变性5 s,60℃退火延伸30 s进行40个循环.应用该方法测试了27份DNA样品,包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA,以确定该方法的特异性.将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测,用以确定该方法的灵敏度.结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线,人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线,其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线.灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应.结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参.

人参;西洋参;双重实时荧光PCR;快速鉴别

孙涛;周林;滕少娜;何玲;陈亭旭;任风鸣;潘英文;孔德英

重庆海关技术中心 重庆 400020;国家中药材物种鉴定及质量安全检测重点实验室 重庆 400020;重庆市药物种植研究所 特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室 重庆 408435;海口海关热带植物隔离检疫中心 海口 570311

世界科学技术-中医药现代化

[1]孙涛;周林;滕少娜;何玲;陈亭旭;任风鸣;潘英文;孔德英-.双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参)[J].世界科学技术-中医药现代化,2022(08):2986-2994

Premix

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